癲癇模型建模方法

1）腹腔注射氯化鋰(127mg／kg)，用以易化匹羅卡品的致癇作用；

2）18.5～23.5h后腹腔注射溴化甲基東莨菪堿(1mg／kg)，用以減輕致癇劑匹羅卡品的外周膽堿能副反應(yīng)；

3）30min后腹腔注射匹羅卡品(60mg／kg)；

4）注射匹羅卡品后對(duì)大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)進(jìn)行觀察，并根據(jù)Racine標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每只大鼠的發(fā)作程度進(jìn)行評(píng)定，癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)規(guī)定為連續(xù)的全身性發(fā)作(4或5級(jí)發(fā)作，4級(jí)主要表現(xiàn)為直立，5級(jí)主要表現(xiàn)為直立并摔倒，均同時(shí)伴有全身陣攣性發(fā)作)或多個(gè)4或5級(jí)發(fā)作，并且行為學(xué)在90min發(fā)作間期內(nèi)未恢復(fù)正常者。記錄發(fā)作的時(shí)間潛伏期(從給藥到SE開(kāi)始的時(shí)間)。如給藥30min后無(wú)SE發(fā)作，重復(fù)給藥一次。

5）SE 90min后，腹腔注射（4mg/kg）終止發(fā)作，以避免癇性發(fā)作致死。發(fā)作程度<4級(jí)的大鼠剔除。飼養(yǎng)1周后觀察，無(wú)自發(fā)性癲癇發(fā)作的大鼠剔除。給予抗癲癇藥物苯妥英鈉(PHT)75mg/kg腹腔注射一次，觀察一周，仍出現(xiàn)癲癇發(fā)作的大鼠給予PHT 75 mg/kg腹腔注射一次，觀察一周，仍出現(xiàn)癲癇發(fā)作的為成功模型。

耐藥相關(guān)指標(biāo)研究  海馬組織，突觸前SV2A蛋白、突觸后PSD-95蛋白、GluR2、miR-485