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組織切片的免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

時(shí)間：2022/5/7閱讀：457
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免疫熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素，當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí)，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見(jiàn)發(fā)出熒光的抗

原抗體結(jié)合部位，檢測(cè)出抗原或抗體。


實(shí)驗(yàn)材料


組織樣品


試劑、試劑盒


PBS 抗體


儀器、耗材


玻片 加濕盒


實(shí)驗(yàn)步驟



1.  將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。
2.  待載玻片達(dá)室濕且未干時(shí)，鋪加PBS于切片上（勿溢出玻片）。
3.  稀釋的第一杭體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min（每一載玻片上加40~50 μl 抗體，應(yīng)能蓋住切片）。
4.  用與泵相連的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1 h。

5.  以PBS冼玻片3次（5 min/次），從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。
6.  稀釋的第二抗體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min（每載玻片可加40~50 μl 抗體）。
7.  將第二抗體加于切片上，置加濕盒中室溫溫育1 h，以PBS洗玻片3次（5 min/次）。


圖一、免疫組化標(biāo)記的各種方法

8.  將蓋玻片放于紙巾上，滴加1滴Gelvatol 于蓋玻片中央。翻過(guò)載玻片放于蓋玻片上（勿施壓），將玻片置工作臺(tái)上，用鋁箔覆蓋避光放置30 min，使Gelvatol 凝結(jié)。

9.  顯微鏡下觀察結(jié)果，或置玻片盒中貯于4℃。




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