HSP-20 ELISA

HSP-20 ELISA樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。檢測對象:人血清/血漿及相關液體實驗方法:雙抗原夾心法進行測

ELISA試劑分類: RD試劑盒，GBD試劑盒，IBL試劑盒

  2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

上海乾思生物科技代理**進口試劑盒，經(jīng)銷眾多生命科學領域的ELISA試劑盒，生化試劑，標準品，抗體，培養(yǎng)基，血清，為中國科研試劑供應商之一，質量被全國各大院?？蒲袡C構認可，
并為Elisa試劑盒長期供應商.

上海乾思生物科技有限公司特別供應進口分裝elisa檢測試劑盒，規(guī)格48T/96T，2-8℃保存，快遞運輸。上海乾思生物成立于2007年，生產(chǎn)經(jīng)營進口分裝的試劑盒產(chǎn)品，有人試劑盒、大鼠試劑盒、小鼠試劑盒、雞試劑盒、鴨試劑盒、豚鼠試劑盒、牛試劑盒、兔子試劑盒、羊試劑盒、山羊試劑盒、綿羊試劑盒、魚試劑盒、豬試劑盒，并且提供試劑盒代測技術服務等。

乾思生物科技有限公司

Shanghai biobaiye Biotech Co.,Ltd

供應人elisa試劑盒、大鼠elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒、兔elisa試劑盒等。標本有：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。

常用生化試劑作用：   

1、蛋白酶K：能水解消化蛋白質，特別是與DNA結合的組蛋白，在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。

2、SDS：十二烷基硫酸鈉，溶解細胞膜上的脂類與蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜，并解離細胞中的核蛋白，SDS 還能與蛋白質結合而沉淀。

3、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等。IPTG和乳糖的結構相似，所以它和乳糖一樣，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結合，

使阻遏蛋白的空間構像變化，四聚體解聚成單體，失去與操縱子特異性結合的能力，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以轉錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定。

4、X-gal：5-溴-4-氯。

樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。檢測對象:人血清/血漿及相關液體實驗方法:雙抗原夾心法進行測

ELISA試劑分類: RD試劑盒，GBD試劑盒，IBL試劑盒

  2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

上海乾思生物科技代理**進口試劑盒，經(jīng)銷眾多生命科學領域的ELISA試劑盒，生化試劑，標準品，抗體，培養(yǎng)基，血清，為中國科研試劑供應商之一，質量被全國各大院?？蒲袡C構認可，
并為Elisa試劑盒長期供應商.

上海乾思生物科技有限公司特別供應進口分裝elisa檢測試劑盒，規(guī)格48T/96T，2-8℃保存，快遞運輸。上海乾思生物成立于2007年，生產(chǎn)經(jīng)營進口分裝的試劑盒產(chǎn)品，有人試劑盒、大鼠試劑盒、小鼠試劑盒、雞試劑盒、鴨試劑盒、豚鼠試劑盒、牛試劑盒、兔子試劑盒、羊試劑盒、山羊試劑盒、綿羊試劑盒、魚試劑盒、豬試劑盒，并且提供試劑盒代測技術服務等。

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Shanghai biobaiye Biotech Co.,Ltd

供應人elisa試劑盒、大鼠elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒。

注：
1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
2.  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
  以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標)，OD值為橫坐標(對數(shù)坐標)，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
 ◇      注意事項：
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分標本需添加抑肽酶。
◇      液體類標本
標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類。
◇      血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。
◇      血漿：
應根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。
◇      尿液、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。
◇      細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
◇      組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
寄標本時需注明以下情況：
標本編號；2、所測項目；3、是否做復孔