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小分子藥物研發(fā)中，篩選能有效結(jié)合目標(biāo)蛋白的分子是非常耗時(shí)耗（財(cái)）力的一個(gè)環(huán)節(jié)，但又是必須進(jìn)行的工作。高失敗率源于結(jié)合情況的錯(cuò)綜復(fù)雜，體外生化實(shí)驗(yàn)的結(jié)合效果，往往不能很好的在細(xì)胞水平進(jìn)行重現(xiàn)。這其中可能是因?yàn)榉肿釉诖┰郊?xì)胞膜時(shí)，出現(xiàn)了被修飾；也可能是因?yàn)榧兓鞍缀驼鎸?shí)細(xì)胞環(huán)境的蛋白構(gòu)象不同。例如，在生化水平顯示很好結(jié)合效果的分子，在細(xì)胞水平可能結(jié)合的是另一個(gè)蛋白。是不是很崩潰……

試想，如果有一個(gè)高通量解決方案讓你可以直接在細(xì)胞水平進(jìn)行小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗(yàn)證，開(kāi)不開(kāi)心，意不意外？

這個(gè)方案就是Alpha^®-CETSA^®！

什么是CETSA^®？

CETSA^®是細(xì)胞熱遷移實(shí)驗(yàn)（Cellular Thermal Shift Assay）的簡(jiǎn)稱(chēng)，是PELAGO公司2012年在歐洲注冊(cè)的技術(shù)。該技術(shù)基于的原理是：每種蛋白質(zhì)都有自身的熱熔曲線（如下圖）。隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生降解（藍(lán)色曲線）；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合小分子以后，該復(fù)合蛋白的熱熔曲線會(huì)右移（紅色虛線），即相同溫度下，未降解蛋白的量會(huì)提高。CETSA^®實(shí)驗(yàn)的樣品來(lái)源十分靈活，可以是細(xì)胞，也可以是活體給藥以后的組織樣本。

傳統(tǒng)的CETSA^®對(duì)于天然構(gòu)象蛋白的檢測(cè)模式主要有Western-Blot和MS方法，這兩種方法都無(wú)法實(shí)現(xiàn)高通量的篩選。2019年7月，PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達(dá)成戰(zhàn)略合作協(xié)議，推出高通量，高靈敏度的CETSA^®HT檢測(cè)方案，即Alpha^®-CETSA^®

Alpha^®-CETSA^®的操作

1.樣品和化合物進(jìn)行孵育。

2.進(jìn)行熱休克操作（建議在PCR儀上進(jìn)行該操作）。

3.加入合適的裂解液。

4.加入Alpha^® CETSA^®檢測(cè)試劑。

5.在具有Alpha^®功能的酶標(biāo)儀上檢測(cè)。

新酶標(biāo)儀加載Alpha^®功能

PerkinElmer公司的Victor NIVO新款酶標(biāo)儀加載了Alpha^®功能，這是目前可以開(kāi)展Alpha^®CETSA^®檢測(cè)細(xì)胞水平蛋白-分子相互作用的小的儀器。

目前，PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點(diǎn)試劑盒有Akt1，BCL-2，EGFR，MEK1和p38 MAKP，工具微珠2套，方便客戶(hù)靈活使用這項(xiàng)技術(shù)。更多的商品化試劑盒也會(huì)陸續(xù)推出。

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