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中藥配方顆粒統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)主要包括兩大塊色譜相關(guān)的內(nèi)容： 首先是【特征圖譜】，配方顆粒作為供試品溶液，其特征 圖譜應(yīng)與對照藥材或者對照品參照物溶液色譜圖具有一定 的相關(guān)性，相關(guān)指標(biāo)有：特征峰的個數(shù)、特征峰的保留時間、 特征峰與參照峰的相對保留時間及相對峰面積，甚至有個 別品種還需要進(jìn)行指紋圖譜相似度評價。此外，紫外吸收 特征成分常用 UV 法進(jìn)行檢測，偶見多波長切換的方法， 而無紫外吸收的成分（如：麩炒薏苡仁中的甘油三油酸酯） 使用蒸發(fā)光散射檢測器進(jìn)行測定，往往需要高濃度的對照 品或者供試品溶液（如：1.0mg/ml的薏苡仁油對照品溶液）， 如何選擇合適的通用型檢測器實現(xiàn)高靈敏度的檢測，應(yīng)該 引起中藥研究者的思考；其次是【含量測定】，含量測定 的色譜方法與特征圖譜的色譜方法可能相同，也可能稍有 簡化，定量指標(biāo)也從 1 個到多個不等，其選取不僅與含量 多少有關(guān)，可能更多的考量在于該指標(biāo)的生物活性是否是 該產(chǎn)品非常重要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，這一點與中藥研究熱點 應(yīng)不謀而合。

成分復(fù)雜，水溶性成分眾多，提取溶媒多與流動相存在極 性差異等，對于液相色譜方法開發(fā)具有一定挑戰(zhàn)，同時對 于建立的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，如何轉(zhuǎn)移至實驗室用于實際工作，復(fù) 現(xiàn)中需要關(guān)注的實驗要點，賽默飛液相應(yīng)用團(tuán)隊整理如下， 以助力客戶在應(yīng)用中順利完成

1. 色譜柱的選擇 基于應(yīng)用團(tuán)隊對中藥配方顆粒近 100 種的復(fù)現(xiàn)結(jié)果，考慮 到色譜柱的通用性和用戶使用的方便程度，特做如下推薦， 在研發(fā)、質(zhì)控過程中可以考慮選用

2. UHPLC 方法開發(fā) 中藥配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)研發(fā)的單位可以將已有 HPLC 方法利用 變色龍軟件中自帶的“Speed up"功能轉(zhuǎn)換成為 UHPLC 方法，實現(xiàn)超快速液相方法的轉(zhuǎn)換，該功能轉(zhuǎn)換的結(jié)果 符合 2020 版《中國藥典》四部 0512 通則的相關(guān)規(guī)定， 請大家放心使用，亦可使用賽默飛網(wǎng)頁版方法轉(zhuǎn)換工具

3. 電霧式檢測器的使用 電霧式檢測器（CAD）作為一款通用型檢測器，參數(shù)設(shè)置 少，操作簡單，維護(hù)較易。如有示差檢測器或者蒸發(fā)光散 射檢測器的色譜方法，可以直接轉(zhuǎn)移至 CAD 檢測器進(jìn)行 復(fù)現(xiàn)嘗試。需要注意的是：①該檢測器同其他通用型檢測 器，流動相體系不可使用不揮發(fā)性酸或者鹽；②該檢測器 靈敏度高，原方法中高濃度樣品建議稀釋 10-50 倍后進(jìn)樣， 避免檢測器過載；③流動相條件允許的情況下，該檢測器 可以直接與紫外檢測器串聯(lián)使用，色譜信息可以互相補(bǔ)充， 互相提示，對于反映中藥產(chǎn)品真實質(zhì)量很有幫助?？捎糜冢?麩炒薏苡仁配方顆粒、地膚子配方顆粒、黃芪配方顆粒等。 

4. 梯度洗脫平衡色譜柱 梯度洗脫目前常用于中藥復(fù)雜體系的分離分析，尤其在超 快速液相方法中，短短幾分鐘內(nèi)，梯度變換幅度很大，且 方法后期并沒有注明有恢復(fù)初始流動相比例的階段，就很 容易誤導(dǎo)個別用戶連續(xù)進(jìn)樣，使得色譜柱在進(jìn)樣下一針的 時候，其內(nèi)部有機(jī)相比例還未平衡，導(dǎo)致色譜峰出峰錯亂、 堆疊、相對保留時間不符合規(guī)定值等異常問題，建議客戶 在變色龍軟件編輯方法時注意在原方法前后增設(shè)約 10 分 鐘（平衡至少 5~10 個柱體積），變色龍軟件支持預(yù)平衡 時間的設(shè)置，即預(yù)平衡后自動開始進(jìn)樣分析，該法不會變 動原色譜方法

5. 強(qiáng)溶劑效應(yīng) 比如，中藥配方顆粒參照物 ( 對照品 / 對照藥材 ) 溶液的 制備，多采用一定比例的甲醇 - 水或乙醇 - 水作為提取溶 劑，而色譜方法里設(shè)置的流動相起始梯度可能為高比例水相，在色譜柱分離過程中，由于提取溶劑的洗脫強(qiáng)度高于 瞬時流動相的洗脫強(qiáng)度，就容易產(chǎn)生峰拖尾、峰裂分等峰 異常現(xiàn)象，甚至可能影響合理積分。建議客戶可以采用以 下實驗小技巧來避免強(qiáng)溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生：①可以減小進(jìn)樣 體積，如原 10μl 改為 5μl；②采購賽默飛液相配件（Strong Solvent Loop，PN：6036.2200）裝在自動進(jìn)樣器與色譜 柱之間；③采用用戶自定義進(jìn)樣程序（UDP）可自定義 編程在線稀釋等功能，實例：赤芍配方顆粒（詳情請參見 Application Note《全新高效液相色譜系統(tǒng) Vanquish Core 并聯(lián)分析赤芍配方顆粒特征圖譜與含量測定》）；④在自 動進(jìn)樣器與色譜柱間使用一段較長的 viper 管路等。

6. 梯度延遲體積差異 因統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)起草單位使用儀器未知，在方法復(fù)現(xiàn)過程中可 能會由于儀器間延遲體積的差異導(dǎo)致色譜圖出現(xiàn)整體提前 或者整體靠后的現(xiàn)象，建議：①客戶在選配儀器時可以訂 購不同體積的靜態(tài)混合器測試使用，在復(fù)雜流動相體系的 方法開發(fā)中可以適當(dāng)調(diào)整混合器的體積，不僅可以滿足優(yōu) 異的混合精度，還能夠復(fù)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)譜圖，最常用到的靜態(tài)混 合器體積有：150μl 或者 350μl；②另外，Vanquish Core 液相色譜系統(tǒng)自帶可調(diào)延遲體積（0-230μl），加配方法轉(zhuǎn) 移套件，最大可增至 430μl，可以滿足客戶在不同儀器間 方法轉(zhuǎn)移的需求，可向應(yīng)用團(tuán)隊索取最新相關(guān)應(yīng)用技術(shù)報 告。 

7. 含量測定方法建議 在現(xiàn)有中藥配方顆粒國家 / 省級標(biāo)準(zhǔn)中，含量測定的方法 多采用等度洗脫的方法，然而并未注明全程洗脫時間，可 能會出現(xiàn)目標(biāo)峰出峰較早，但其他非重點關(guān)注成分峰仍在 色譜圖中不斷洗脫出來，建議客戶在此類情況中不要急于 結(jié)束洗脫，為了避免上一針樣品中殘留成分的干擾，樣品 采集時間需大于主成分保留時間 6 倍以上，確保上一針樣 品成分全部洗脫后，方可進(jìn)行下一針樣品的分析。

8. 其他：特征峰丟失 該問題的出現(xiàn)往往與前處理是否完整、提取溶劑是否合適、 色譜柱保留等問題有關(guān)，可以具體問題具體分析再排查