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液相色譜的幾個基本概念和術(shù)語
1.色譜圖和峰參數(shù)色譜圖(chromatogram)--樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器,所得到的信號-時間曲線,又稱色譜流出曲線(elution profile)?;€(base line)--經(jīng)流動相沖洗,柱與流動相達(dá)到平衡后,檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時間軸。噪音(noise)--基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。漂移(drift)--基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起,柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產(chǎn)生漂移。色譜峰(peak)--組分流經(jīng)檢測器時響應(yīng)的連續(xù)信號產(chǎn)生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱形正態(tài)分布曲線(高斯Gauss曲線)。不對稱色譜峰有兩種:前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少見。拖尾因子(tailing factor,T),用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetry factor)或不對稱因子(asymmetry factor)?!吨袊幍洹芬?guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。T<0.95為前延峰,T>1.05為拖尾峰。峰底-基線上峰的起點(diǎn)至終點(diǎn)的距離。峰高 (peak height,h)-峰的zui高點(diǎn)至峰底的距離。峰寬(peak width,W)-峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線與基線的兩個交點(diǎn)間的距離。W=4σ半峰寬(peak width at half-height,Wh/2)-峰高一半處的峰寬。Wh/2=2.355σ標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard deviation,σ)-正態(tài)分布曲線x=±1時(拐點(diǎn))的峰寬之半。正常峰的拐點(diǎn)在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。σ小,分散程度小、極點(diǎn)濃度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。峰面積(peak area,A)-峰與峰底所包圍的面積。
2.定性參數(shù)(保留值)死時間(dead time,t0)--不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間。在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來測定死時間。死體積(dead volume,V0)--由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展,這3部分體積應(yīng)盡量減小。 V0=F×t0(F為流速)保留時間(retention time,tR)--從進(jìn)樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時間。保留體積(retention volume,VR)--從進(jìn)樣開始到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值時流出溶劑的體積。又稱洗脫體積。VR=F×tR調(diào)整保留時間(adjusted retention time,tR)--扣除死時間后的保留時間。也稱折合保留時間(reduced retention time)。在實(shí)驗(yàn)條件(溫度、固定相等)一定時,tR只決定于組分的性質(zhì),因此,tR(或tR)可用于定性。tR=tR-t0調(diào)整保留體積 (adjusted retention volume,VR)--扣除死體積后的保留體積。