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了解下化學(xué)發(fā)光定氮儀！
閱讀：1581 發(fā)布時(shí)間：2022-7-21
化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單、操作方便、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用最多的標(biāo)記物。
微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時(shí)應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體最大限度的結(jié)合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進(jìn)而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物，當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時(shí)產(chǎn)生光子。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時(shí)間大大縮減，同時(shí)因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。
工作原理：
化學(xué)發(fā)光定氮儀采用化學(xué)發(fā)光檢測原理，待測樣品（或標(biāo)樣）被引入到高溫裂解爐后，在1050℃左右的高溫下，樣品被*氣化并發(fā)生氧化裂解，其中的氮化物定量地轉(zhuǎn)化為一氧化氮(NO)。樣品氣經(jīng)過膜式干燥器脫去其中的水份。亞穩(wěn)態(tài)的一氧化氮在反應(yīng)室內(nèi)與來自臭氧發(fā)生器的O3氣體發(fā)生反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為激發(fā)態(tài)的NO2*。當(dāng)激發(fā)態(tài)的NO2*躍遷到基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子，光信號由光電倍增管按特定波長檢測接收。再經(jīng)微電流放大器放大、計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理，即可轉(zhuǎn)換為與光強(qiáng)度成正比的電信號。在一定的條件下,反應(yīng)中的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與一氧化氮的生成量成正比，而一氧化氮的量又與樣品中的總氮含量成正比，故可以通過測定化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度來測定樣品中的總氮含量。
化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細(xì)菌和原蟲的DNA。以魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標(biāo)記探針，雜交后經(jīng)過分離，再以過氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，加入魯米諾和增強(qiáng)劑后測發(fā)光。另一種是以過氧化物酶直接標(biāo)記探針，用增強(qiáng)的魯米諾檢測發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標(biāo)記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時(shí)光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點(diǎn)，發(fā)光時(shí)間可長達(dá)幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測。