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方法概要：在嬰幼兒配方食品和乳粉中加入適量的脂酶，酶解后用NaOH 皂化，用正己烷萃取，
蒸干后用正己烷溶解，用液相色譜柱后衍生法（HPLC-鋅粉還原柱）用熒光檢測
器定量測定維生素K1。
關 鍵 詞：嬰幼兒配方食品，乳粉，HPLC，鋅粉還原柱
參考方法：采用即將替代GB/T5413.10-1997 的新國標（還沒有正式公布）
方法步驟：
1、 試劑和耗材：HPLC 級正己烷（CAEQ-4- ）；無水硫酸鈉（CBEQ-4-103502-1000 ）；HPLC
級甲醇（CAEQ-4-003302-4000 ）；HPLC 級冰醋酸（乙酸，CAEQ-4-）；HPLC 級二氯
甲烷（CAEQ-4-012001-4000）；維生素K1 標準品（CDCT-C17924400 ）
2、 提?。悍Q取約2.5 g（到0.1mg）混合均勻的試樣于三角瓶中（含淀粉的試樣加入0.5g 淀粉酶），用
30ml 溫水溶解，加入1g 酯酶，于37℃恒溫空氣震蕩器中震蕩過夜，使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L
氫氧化鈉溶液，轉移至500ml 的分液漏斗中，加入50ml 乙醇，充分混勻。再加入50ml 正己烷，加塞振搖
2min，靜置分層。放出下層于另一個500ml 分液漏斗中再次加入50ml 正己烷萃取，靜置分層，棄去水相，
合并正己烷。加入適量蒸餾水洗有機相兩次，棄取水相，將正己烷通過無水硫酸鈉過濾到500ml 的平底燒
瓶中，在旋轉蒸發(fā)器上40℃下蒸發(fā)至近干，用正己烷轉移殘留物到10ml 指形瓶中，用氮氣吹干，準確加
入1ml 正己烷，充分振蕩溶解殘留物，得到待測液，在冰箱中冷凍一小時后備用。
3、 HPLC 測定方法：
4.1 色譜柱：Cnwsil C18，150×4.6mm, 5μm（LAEQ-1815004605）
4.2 衍生柱：鋅粉還原柱，35×4.6mm（LAAA-0001）
4.3 流動相：甲醇900ml，二氯甲烷100ml，冰醋酸0.3 ml，氯化鋅1.5g，無水乙酸鈉0.5g，溶解過0.45
濾膜。
4.4 進樣量：10 μL
4.5 流 速：1.0 mL/min
4.6 檢測波長：熒光檢測器：波長EX=243nm EM=430nm
上海安譜科學儀器有限公司
Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. ：www.anpel.com.cn ：
4、結果分析：
4.1、分析圖譜
VK1 標準溶液色譜圖（熒光檢測器）0.4ug/ml VK1 標準溶液色譜圖（熒光檢測器）0.04ug/ml
嬰幼兒配方色譜圖（熒光檢測器）
5.2、結果分析
用Cnwsil C18（150×4.6mm, 5μm）色譜柱和鋅粉還原柱（35×4.6mm）串聯(lián)柱后衍生法分析嬰幼
兒配方食品中的維生素K1，分離效果良好，峰形對稱，重復性好。