B16-F10-OVA鼠黑色素瘤細(xì)胞-OVA雞基因修飾

細(xì)胞鑒定：種屬鑒定已通過(guò)  

細(xì)胞來(lái)源 ：國(guó)家資源庫(kù)  

細(xì)胞背景：紡錘形和上皮樣細(xì)胞的混合物

細(xì)胞特性 

1） 來(lái)源：小鼠黑色素瘤

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用

培養(yǎng)條件 

1） 準(zhǔn)備 DMEM(含 NaHCO3 1.5g / L）

添加 NaHCO3 1.5g/L）89 %，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10 %，P/S 雙抗 1%2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度

為 70%-80%。

注意事項(xiàng)

該細(xì)胞在 DMEM(含 1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，大部分品牌的 DMEM 含有較高

濃度的 NaHCO3（3.7g/L），若使用 DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提

高 CO2 濃度（7%-10%）。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，

T75 瓶 2-3mL），

置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯

微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)

瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液

后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說(shuō)明書要求配置

的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

B16-F10-OVA鼠黑色素瘤細(xì)胞-OVA雞基因修飾

運(yùn)輸形式 

低溫：（1）1mL 凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80 度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接

復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立

即與我們聯(lián)系。

常溫: （2） T25 瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注

意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸

沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或

用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。