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Real-titer慢病毒滴度測(cè)定(Q-PCR)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-07-28 11:39:07瀏覽次數(shù):320

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100 test
貨號(hào) GE-20006-100 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,制藥,綜合
本試劑盒能夠快速、簡(jiǎn)便、高效地對(duì)基于HIV-1構(gòu)建的慢病毒進(jìn)行有效滴度測(cè)定。通過(guò)對(duì)感染慢病毒的細(xì)胞基因組DNA中整合的慢病毒插入片段拷貝數(shù)進(jìn)行Q-PCR測(cè)定,計(jì)算出初始病毒的有效滴度。Real-titer慢病毒滴度測(cè)定(Q-PCR)試劑盒

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品介紹

本試劑盒能夠快速、簡(jiǎn)便、高效地對(duì)基于HIV-1構(gòu)建的慢病毒進(jìn)行有效滴度測(cè)定。通過(guò)對(duì)感染慢病毒的細(xì)胞基因組DNA中整合的慢病毒插入片段拷貝數(shù)進(jìn)行Q-PCR測(cè)定,計(jì)算出初始病毒的有效滴度。

產(chǎn)品特點(diǎn)
?本產(chǎn)品采用感染病毒后靶細(xì)胞基因組作為模板,測(cè)得數(shù)據(jù)更真實(shí)

?基于Taqman探針法開發(fā)本產(chǎn)品,結(jié)果更準(zhǔn)確
?適用于所有基于HIV-1病毒構(gòu)建的慢病毒滴度測(cè)定


產(chǎn)品成分

試劑名稱

內(nèi)容

數(shù)量

Solution 1

標(biāo)準(zhǔn)品DNA模板(5x10^9 c/μl)

100μl

Solution 2

Lenti-primer (10μM)

40μl

Solution 3

Lenti-probe –FAM/TAMRA(2.5μM)

80μl

Solution 4

Taq (probe qPCR) (2X)

1ml

Solution 5

ROXI(50X)

40μl

Solution 6

ROX II(50X)

80μl


其他所需材料

細(xì)胞基因組DNA抽提試劑(離心柱法)

超純水

Q-PCR用96孔板或8連管

定量PCR儀

1.5ml無(wú)酶離心管用于樣品制備

無(wú)酶槍尖


Real-titer慢病毒滴度測(cè)定(Q-PCR)試劑盒

操作步驟

1.取感染72h后的293T細(xì)胞,胰酶消化制備單細(xì)胞懸液,細(xì)胞計(jì)數(shù),得細(xì)胞數(shù)為N;

2.利用細(xì)胞基因組抽提試劑盒提取293T細(xì)胞基因組DNA,測(cè)定基因組DNA總量為G (μg),稀釋至50ng/μl備用;

注:此步驟推薦使用分離柱式基因組抽提試劑盒

3.根據(jù)下表稀釋標(biāo)準(zhǔn)品及基因組DNA樣品:


標(biāo)準(zhǔn)品管

樣品管

#

稀釋倍數(shù)

Water

標(biāo)準(zhǔn)品

拷貝數(shù)/μl

稀釋倍數(shù)

Water

樣品(50ng/μl)

1

10^1

45μl

5μl

5.45x10^8

10

45μl

5μl
2

10^2

45μl

5μl of 1#

5.45x10^7

50

40μl

10μl of #1

3

10^3

45μl

5μl of 2#

5.45x10^6

10045

5μl of #1

4

10^4

45μl

5μl of 3#

5.45x10^5


5

10^5

45μl

5μl of 4#

5.45x10^4

6

10^6

45μl

5μl of 5#

5.45x10^3

梯度稀釋取樣前,需充分混勻;

4.根據(jù)下表配制反應(yīng)液,每組配制3個(gè)復(fù)孔:

試劑

用量

終濃度

標(biāo)準(zhǔn)品或樣本

2μl

*1

Lenti-primer (10μM)

0.4μl

0.2μM

Lenti-probe (2.5μM)

0.8μl

0.1μM

Taq (probe qPCR) (2X)

10μl

1X

ROX

*2


Water

補(bǔ)至20μl


*1:樣本除步驟3中稀釋的3種濃度外,另需一組未稀釋樣本,即總量為100ng/孔;另需設(shè)置陰性對(duì)照孔,即不添加任何DNA模板;

*2:根據(jù)所使用儀器添加:


適用儀器

ROX I (終濃度1X)

7300 Real-Time PCR System/ StepOnePlus Real-Time PCR System

ROX II (終濃度0.5X)

7500 Real-Time PCR System/7500 Fast Real-Time PCR System

無(wú)需ROX

Thermal Cycler Dice Real Time System series/ LightCycler 480 System/ CFX96 Real-Time PCR Detection System

5.上機(jī),按照以下程序進(jìn)行Q-PCR反應(yīng):

變性 (1 Cycle):95℃ 30s

擴(kuò)增 (40 cycles):95℃ 5s + 60℃ 30

注:可根據(jù)具體使用儀器自行調(diào)整程序。

6.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線:計(jì)算每組標(biāo)準(zhǔn)品的平均Ct值,以平均Ct值為X,Loge(copy number)為Y,生成標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=A*Ct+B。標(biāo)準(zhǔn)曲線R2需大于0.99;

7.計(jì)算樣本平均Ct值,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出copy number=n。

注:以Ct值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)為準(zhǔn),若樣本Ct值超過(guò)或低于標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct值,需對(duì)樣本稀釋倍數(shù)進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。

8.計(jì)算病毒滴度:舉例

Titer(TU/ml)=[n*d*(G/0.1)/N]*Nori/V

其中:n=步驟7中計(jì)算所得拷貝數(shù);d=所用Ct值對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)(1, 10, 50, 100);G=基因組提取所得DNA總量(μg);N=基因組提取所用細(xì)胞數(shù);Nori=病毒感染時(shí)細(xì)胞數(shù);V=病毒感染時(shí)病毒用量(ml)。

計(jì)算各個(gè)Ct值位于標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的不同稀釋倍數(shù)組病毒滴度,取平均值為最終結(jié)果。


上海樂賽生物科技有限公司提供的Real-titer慢病毒滴度測(cè)定(Q-PCR)試劑盒,供貨周期為現(xiàn)貨,請(qǐng)放心選擇。上海樂賽生物科技有限公司還可為用戶供應(yīng)優(yōu)質(zhì)的PEGeasy 病毒濃縮試劑、Acme-packaging病毒包裝試劑盒、15ml/50ml尖底離心管等產(chǎn)品,歡迎在線咨詢。








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