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親和層析是基于生物分子與其他配基分子之間（如抗原與抗體、酶與底物、激素與受體、核酸中的互補(bǔ)鏈、多糖與蛋白復(fù)合體等）的特異性吸附原理建立和發(fā)展起來的。通過介質(zhì)上的配基與目標(biāo)分子之間的特異性吸附來實現(xiàn)純化目標(biāo)分子的目的。由于這種特異性的作用力，親和層析具有高度選擇性、高活性回收等特點。

 將Protein A和Protein G等物質(zhì)偶聯(lián)在高強(qiáng)度交聯(lián)瓊脂糖上，廣泛用于抗體的純化。

抗體純化工藝過程

抗體純化親和介質(zhì)列表

應(yīng)用案例

Plasmid系列填料純化原理是利用配基的嗜硫吸附，適用于分離純化閉環(huán)的超螺旋質(zhì)粒DNA。

質(zhì)粒DNA純化親和介質(zhì)列表

 過渡態(tài)金屬離子 （Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+）能夠與電子供體，如N、S、O等原子以配位鍵結(jié)合，金屬離子上剩余的空軌道是電子供體的配位點，在溶液中會被水分子或陰離子占據(jù)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)表面氨基酸殘基（His）與金屬離子的結(jié)合力較強(qiáng)時，氨基酸殘基的供電原子就會與金屬離子結(jié)合形成復(fù)合物，取代原先結(jié)合的水分子或陰離子，這樣就能使蛋白質(zhì)分子結(jié)合在固體表面。His標(biāo)簽蛋白的His和介質(zhì)結(jié)合，由于蛋白質(zhì)表面的氨基酸的種類、數(shù)量、位置和空間構(gòu)象不同，因而具體使用時根據(jù)金屬配基的親和力大小不同，選擇不同的金屬配基進(jìn)行分離純化。

★螯合離子（和His結(jié)合力）Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+，其中：Cu2+結(jié)合力強(qiáng)，Ni2+最'常用，Co2+結(jié)合力較弱而分辨率高。

His標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)

     His標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)是將金屬離子（Cu2+>Ni2+>Zn2+>Co2+）螯合在高強(qiáng)度交聯(lián)的瓊脂糖上制備而成的親和介質(zhì)。根據(jù)螯合方式不同，又分為IDA,IMAC,TED三種。

His標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)對比

His標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)列表

應(yīng)用案例

His標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)的清洗

His標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)常見問題

（1）His標(biāo)簽蛋白不和介質(zhì)結(jié)合

可能原因a：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化；太小，蛋白沒有全部釋放）

解決方法：改變超聲功率或采用其它方法破碎細(xì)胞

可能原因b：樣品或緩沖液不合適

解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高

可能原因c：His標(biāo)簽暴露不完全

解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質(zhì)純化

可能原因d：His標(biāo)簽丟失

解決方法：必要時增加His的個數(shù)并確保正確表達(dá)，同時降低上樣速度，確保足夠的孵育時間

（2）His標(biāo)簽蛋白結(jié)合在介質(zhì)上洗脫困難

可能原因a：洗脫條件太溫和

解決方法：增加洗脫咪唑濃度或降低pH

可能原因b：蛋白沉積在介質(zhì)上

解決方法：減少上樣量，優(yōu)化層析條件

可能原因c：非特異性結(jié)合

解決方法：緩沖液加2% Triton X-100和NaCl

（3）洗脫峰雜質(zhì)多

可能原因：非特異性結(jié)合，清洗不徹'底，降解等

解決方法：純化過程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要徹'底清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結(jié)合

（4）使用幾次，介質(zhì)結(jié)合效率降低，柱效降低

可能原因：介質(zhì)上沉積大量雜質(zhì)等

解決方法：徹'底清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理

     GST（谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶）能特異的與谷胱甘肽結(jié)合，表現(xiàn)為酶和底物的作用原理，利用這個原理，將GST做成標(biāo)簽表達(dá)出融合蛋白，與谷胱甘肽配基的親和介質(zhì)特異性結(jié)合，從而純化出目標(biāo)蛋白。GST融合蛋白純化的特點是：純度高，純化條件溫和保持蛋白活性，促進(jìn)蛋白可溶性表達(dá)等。

GST標(biāo)簽蛋白純化親和介質(zhì)列表

應(yīng)用案例

     絲氨酸蛋白酶純化親和介質(zhì)，是將絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑對氨基苯甲醚偶聯(lián)在瓊脂糖微球Focurose FF和高強(qiáng)度交聯(lián)的瓊脂糖Focurose4FF制備而成，稱為Benzamidine Focurose FF(LS)和Benzamidine Focurose 4FF(HS)。

絲氨酸蛋白酶純化親和介質(zhì)列表

肝素親和介質(zhì)列表

    PS Focurose HPL是一種特定的親和填料，適用于部分病毒、病毒樣顆粒以及某些特定的抗原和蛋白的親和層析純化。

病毒，病毒/微生物抗原純化親和介質(zhì)列表

PS Focurose HPL適用性

     預(yù)活化介質(zhì)也稱為親和介質(zhì)活化中間體，是在各種交聯(lián)強(qiáng)度瓊脂糖的基礎(chǔ)上，通過不同的偶聯(lián)方法鍵合上不同的活性基團(tuán)（活性間隔臂）。通過活性基團(tuán)可進(jìn)一步偶聯(lián)各種配基，用于制備其它介質(zhì)（主要是親和介質(zhì)）及固定相應(yīng)物質(zhì)，用戶可根據(jù)自己需求把待偶聯(lián)的配基很容易地偶聯(lián)上去，避免了前期接活性基團(tuán)的繁瑣工序。

預(yù)活化介質(zhì)列表

應(yīng)用案例

預(yù)活化介質(zhì)的特點

★CNBr Focurose 4FF應(yīng)用廣泛，無需偶聯(lián)間隔臂，直接偶聯(lián)各種帶氨基的生物大分子，多位點偶聯(lián)，簡單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩(wěn)定性。

★NHS Focurose 4FF易與蛋白形成酰胺鍵，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

★Epoxy Focurose 4FF應(yīng)用廣泛，偶聯(lián)條件溫和，偶聯(lián)效率高。