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Cell Counting Kit-8 的工作原理與應(yīng)用領(lǐng)域說明

閱讀：67 發(fā)布時間：2024-11-7

　　Cell Counting Kit-8是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測的試劑盒。其核心成分是水溶性四唑鹽，在細(xì)胞存活狀態(tài)下，可以被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原為橙黃色的水溶性甲臜產(chǎn)物。通過測定甲臜產(chǎn)物的吸光度，可以間接反映細(xì)胞的存活情況和增殖能力。

　　一、工作原理

　　Cell Counting Kit-8的工作原理基于顏色變化。WST-8是一種類似于MTT（四唑鹽）的水溶性化合物，但其毒性更低，更適合用于細(xì)胞活性檢測。在細(xì)胞存活狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶可以將WST-8還原為橙黃色的甲臜產(chǎn)物（Formazan）。甲臜產(chǎn)物的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，因此可以通過測定甲臜產(chǎn)物的吸光度來評估細(xì)胞的存活情況和增殖能力。

　　具體步驟如下：

　　細(xì)胞接種

　　將待測細(xì)胞接種到96孔板中，每孔加入一定數(shù)量的細(xì)胞。

　　加入Cell Counting Kit-8試劑

　　在細(xì)胞培養(yǎng)一定時間后，向每孔中加入適量的試劑?？梢灾苯蛹尤氲郊?xì)胞培養(yǎng)基中，無需去除原有的培養(yǎng)基。

　　測量吸光度

　　使用酶標(biāo)儀測定每孔中甲臜產(chǎn)物的吸光度。吸光度的大小與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，從而可以計算出細(xì)胞的存活率和增殖能力。

　　二、應(yīng)用領(lǐng)域

　　細(xì)胞增殖檢測

　　廣泛用于檢測細(xì)胞的增殖能力，適用于各種類型的細(xì)胞，包括腫瘤細(xì)胞、原代細(xì)胞和干細(xì)胞等。

　　細(xì)胞毒性檢測

　　可以用于評估藥物、化學(xué)物質(zhì)和其他因素對細(xì)胞的毒性作用。通過比較處理組和對照組的吸光度，可以計算出細(xì)胞的存活率和毒性指數(shù)。

　　藥物篩選

　　在高通量藥物篩選中具有重要應(yīng)用，可以快速評估大量化合物對細(xì)胞的影響，幫助研究人員篩選出具有潛在治療價值的候選藥物。

　　疾病研究

　　可用于研究疾病的發(fā)生機(jī)制和進(jìn)展，例如腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)退行性疾病等。

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