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Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

MCE 國(guó)際站：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20℃ 保存一年。避光保存，避免反復(fù)凍融。

簡(jiǎn)介：MCE Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可方便、快捷的檢測(cè)細(xì)胞凋亡。經(jīng) Annexin V-FITC 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無(wú)熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

概述：MCE Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用 FITC 標(biāo)記的重組人Annexin V 檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸 PS）位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞凋亡早期， PS 會(huì)外翻到細(xì)胞膜外側(cè)。 Annexin V （膜聯(lián)蛋白 V）是一種 Ca 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與 PS 特異性結(jié)合，因此Annexin V 常作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。Annexin V 經(jīng) FITC 標(biāo)記后可發(fā)綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外，本試劑盒中的碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色液是一種不能穿透細(xì)胞膜的紅色熒光染料，可對(duì)凋亡晚期細(xì)胞及壞死細(xì)胞染色。經(jīng) Annexin V-FITC 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無(wú)熒光（Annexin V-/PI-）早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

描述：

MCE Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一種快速、方便的檢測(cè)細(xì)胞凋亡和壞死的方法。在正常活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面。在細(xì)胞凋亡開(kāi)始時(shí)，PS 從膜的內(nèi)層轉(zhuǎn)移到外層。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca²⁺ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對(duì) PS 具有高親和力。用綠色熒光 FITC 標(biāo)記的 Annexin V 可以通過(guò)與外層暴露的 PS 結(jié)合來(lái)識(shí)別凋亡細(xì)胞。碘化丙啶 (PI) 是一種細(xì)胞膜不通透性染料，對(duì)活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞有效，但對(duì)晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞則呈紅色熒光。染色后活細(xì)胞無(wú)熒光或僅有少量熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞呈紅色和綠色熒光（Annexin V+/PI+）。

操作說(shuō)明：1. 收集細(xì)胞： 收集 1-5 × 10 個(gè)細(xì)胞。懸浮細(xì)胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。貼壁細(xì)胞：小心吸取細(xì)胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆谩＜尤?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合）消化細(xì)胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細(xì)胞。3. 加入 5 μL Annexin V-FITC，輕輕混勻。4. 加入 10 μL PI Stain，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 10-20 min。注： 孵育過(guò)程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強(qiáng)染色效果。6. 檢測(cè)與分析流式細(xì)胞儀檢測(cè)：用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。注：a. 流式檢測(cè)時(shí)，F(xiàn)ITC 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 525 nm，在 FL1 通道檢測(cè)；PI-DNA 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 535 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 617 nm，在 FL2 或FL3 通道檢測(cè)。b. 建議設(shè)置三組對(duì)照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-FITC 單染組。熒光顯微鏡檢測(cè)：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

注意事項(xiàng)：1. 熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，染色后應(yīng)盡快檢測(cè)熒光強(qiáng)度，且整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程盡量避光下進(jìn)行。2. 若使用胰酶處理貼壁細(xì)胞，應(yīng)盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V-FITC 降解從而導(dǎo)致染色失敗。3. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，若 Annexin V-FITC 單獨(dú)染色組出現(xiàn)較多 PI 假陽(yáng)性細(xì)胞，可用 PBS 將 Annexin V-FITC 稀釋 3-10 倍后再進(jìn)行檢測(cè)。4. Annexin V-FITC 和碘化丙啶（PI）均對(duì)人體有害，操作時(shí)務(wù)必小心。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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