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細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒

MCE 國際站：Apoptosis and Necrosis Assay Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：4℃ 保存 6 個月或者 -20℃ 保存一年。避光保存

簡介：MCE 細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染的方法快速檢測細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死。

概述：MCE 細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染的方法快速檢測細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死。Hoechst 33342 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。細(xì)胞凋亡時，細(xì)胞膜通透性增強，染色質(zhì)發(fā)生固縮，且凋亡細(xì)胞膜上的 p-糖蛋白泵功能受損而不能及時將 Hoechst 33342 排出細(xì)胞，故凋亡細(xì)胞經(jīng) Hoechst 33342 染色后熒光強度比正常細(xì)胞明顯增強。PI 是一種不能穿透細(xì)胞膜的紅色熒光染料，對于細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞不能染色，當(dāng)細(xì)胞壞死時，細(xì)胞膜的完整性喪失，可被 PI 染色。上述兩種染料雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測，正常細(xì)胞為弱藍(lán)色熒光+弱紅色熒光，凋亡細(xì)胞為強藍(lán)色熒光+弱紅色熒光，壞死細(xì)胞為強藍(lán)色熒光+強紅色熒光。本試劑盒染色快速方便，僅需 20-30 分鐘即可完成一步染色，使用流式細(xì)胞儀檢測時，無需稀釋等配制過程，也無需準(zhǔn)備其他溶液。本試劑盒可檢測100 個樣品，每個樣品的細(xì)胞數(shù)量可為 105-106 個。

描述：

MCE 凋亡和壞死檢測試劑盒提供了一種快速方便的檢測細(xì)胞凋亡和壞死的方法。該試劑盒包含兩種與 DNA 結(jié)合的即用型染料。Hoechst 33342 是一種藍(lán)色熒光染料（與 DNA 結(jié)合時激發(fā)/發(fā)射最大值 ≈ 352/461 nm），它使凋亡細(xì)胞中濃縮的染色質(zhì)比正常細(xì)胞中的染色質(zhì)更亮。碘化丙啶 (PI) 是一種細(xì)胞膜不透性染料，其特征性激發(fā)最大值為 535 nm，發(fā)射最大值為 617 nm，可與核酸插入。同時使用這兩種染料可以通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡區(qū)分正常、凋亡和死亡細(xì)胞群。正常細(xì)胞顯示弱藍(lán)色熒光 + 弱紅色熒光，凋亡細(xì)胞顯示強藍(lán)色熒光 + 弱紅色熒光，壞死細(xì)胞顯示強藍(lán)色熒光 + 強紅色熒光。

本試劑盒一步染色僅需20-30分鐘，流式檢測時無需稀釋或配制其他溶液，每套試劑盒含有足夠100個樣本的試劑。

操作說明：1. 收集細(xì)胞懸浮細(xì)胞：在 1.5 mL 離心管中加入約 105-106 個細(xì)胞。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 重懸細(xì)胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min后棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。貼壁細(xì)胞：棄去細(xì)胞培養(yǎng)液。加入胰蛋白酶消化細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液。4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 重懸細(xì)胞，4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。2. 雙染色2.1 加入 0.8-1 mL Cell Stain Buffer 重懸細(xì)胞。2.2 加入 5 μL Hoechst 33342 Stain。2.3 加入 5 μL PI Stain。2.4 充分混勻后冰浴或 4℃ 孵育 20-30 min。3. 檢測與分析3.1 流式細(xì)胞儀檢測：用流式細(xì)胞儀檢測熒光強度。3.2 熒光顯微鏡檢測：4℃，1000 g 離心 3-5 min，棄去上清，加入 PBS 洗滌一次，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。注：Hoechst 33342 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波長為 352 nm，最大發(fā)射波長為 461 nm；PI 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波長為 535 nm，最大發(fā)射波長為 617 nm

注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應(yīng)盡快檢測熒光強度。2. Hoechst 33342 和 PI 對光敏感，整個實驗過程盡量避光下進(jìn)行。3. Hoechst 33342 和碘化丙啶（PI）均對人體有害，操作時務(wù)必小心。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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