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組織線粒體分離試劑盒

MCE 國際站：Mitochondria Isolation Kit for Tissue

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20oC 保存一年

簡介：MCE 組織線粒體分離試劑盒可快速分離動物組織的線粒體，且線粒體純度較高，絕大多數(shù)具有完整的內(nèi)外膜及生理功能。

概述：線粒體是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的主要部位，具有雙層膜結(jié)構(gòu)。制備線粒體的關(guān)鍵在于確保線粒體的完整性和純度。通常先低速離心去除細(xì)胞核及細(xì)胞碎片，再高速離心獲得線粒體。MCE 組織線粒體分離試劑盒可快速分離動物組織的線粒體，且線粒體純度較高，絕大多數(shù)具有完整的內(nèi)外膜及生理功能。提取的線粒體也可被相應(yīng)裂解液裂解后得到線粒體蛋白，用于 SDS-PAGE、WB、雙向電泳等蛋白分析。 此外，本試劑盒也可用于提取不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白。本試劑盒可檢測 50-100 個樣品，建議每個組織樣品的重量為 50-100 mg。

描述：

線粒體是真核細(xì)胞中大部分能量產(chǎn)生的場所，具有雙層膜結(jié)構(gòu)：外膜和折疊的內(nèi)膜。線粒體的制備關(guān)鍵是確保線粒體的完整性和純度。

MCE 組織線粒體分離試劑盒采用差速離心法，可快速高效地從組織中分離線粒體。分離出的線粒體大部分具有完整的內(nèi)外膜，并具有生理功能。此外，該試劑盒還可用于提取線粒體蛋白和不含線粒體的胞質(zhì)蛋白。該試劑盒含有足夠的試劑，可從 50-100 mg 組織中進(jìn)行 50-100 次分離程序。

操作說明：從軟組織 (肝臟、腦等) 中分離線粒體1. 稱取約 50-100 mg 新鮮組織。加入 PBS 洗滌一次。注：通常要求使用動物處死后不超過一小時并保存在冰上的組織。禁止使用冷凍保存的組織。2.將組織剪成盡可能小的小塊,加入 10 倍體積預(yù)冷的 Mitochondria Isolation Reagent A (含1 mM PMSF)。注:a.若組織重量為50mg,可大致認(rèn)為組織體積為50μL,即加入500 pLMitochondria Isolation Reagent A。b.PMSF 本試劑盒未提供,需另行購買。3. 將組織懸液在冰上勻漿 10 次左右。4. 將組織勻漿 600 g，4oC 離心 5 分鐘。注：此步離心目的在于去除細(xì)胞核、細(xì)胞碎片及未裂解細(xì)胞。將離心速度提升至 1,000 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降。5. 將上清轉(zhuǎn)移至干凈的離心管，11,000 g，4oC 離心 10 分鐘。注：此步離心目的在于沉淀線粒體。將離心速度改為 3,500 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降。6. 棄去上清，所得沉淀即為線粒體。注：此步驟也可用于獲得不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白。收集本步驟中的上清，12,000 g，4oC 離心 10 分鐘，獲得的上清液即為不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白。后續(xù)可用 BCA 法或 Bradford 法測定蛋白濃度從硬組織 (心肌、骨骼肌等) 中分離線粒體1. 稱取約 50-100 mg 新鮮組織。加入 PBS 洗滌一次。注：通常要求使用動物處死后不超過一小時并保存在冰上的組織。禁止使用冷凍保存的組織。2. 將組織剪成盡可能小的小塊，加入 10 倍體積預(yù)冷的 PBS，冰浴 3 分鐘，600 g 離心 10-20 秒，棄去上清，保留組織沉淀。3. 加入 8 倍體積預(yù)冷的 Trypsin Buffer，冰浴 20 分鐘，600 g 離心 10-20 秒，棄去上清，保留組織沉淀。4. 加入 2 倍體積 Mitochondria Isolation Reagent 重懸組織，600 g 離心 10-20 秒，棄去上清，保留組織沉淀。注：若是心肌組織，使用 Mitochondria Isolation Reagent A；若是骨骼肌組織，使用 Mitochondria lsolation Reagent B 。 其余組織可以優(yōu)先考慮 Mitochondria lsolation Reagent A。5. 加入 8 倍體積預(yù)冷的相應(yīng) Mitochondria Isolation Reagent (含 1 mM PMSF)，在冰上勻漿 20-30 次。6. 將組織勻漿 600 g，4oC 離心 5 分鐘。注：此步離心目的在于去除細(xì)胞核、細(xì)胞碎片及未裂解細(xì)胞。將離心速度提升至 1,000 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降。7. 將上清轉(zhuǎn)移至干凈的離心管，11,000 g，4oC 離心 10 分鐘。注：此步離心目的在于沉淀線粒體。將離心速度改為 3,500 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降。8. 棄去上清，所得沉淀即為線粒體。注：此步驟也可用于獲得不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白。收集本步驟中的上清，12,000 g，4oC 離心 10 分鐘，獲得的上清液即為不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白。后續(xù)可用 BCA 法或 Bradford 法測定蛋白濃度。線粒體的應(yīng)用a. 完整線粒體的功能及酶活研究：每 100 mg 組織分離得到的線粒體中加入 40 μL Mitochondria Storage Buffer，重懸備用。后續(xù)可使用 MCE 線粒體膜電位檢測試劑盒 (Cat. No.: HY-K0601) 測定分離得到的線粒體的膜電位。b. 線粒體蛋白分析：每 50-100 mg 組織分離得到的線粒體中加入 150-200 μL 臨用前添加了 PMSF 的 Mitochondria Lysis Buffer (PMSF 終濃度為 1 mM)。裂解后得到的線粒體蛋白經(jīng) 12,000 g，4oC ，離心 3-5 min 后可用于可用于 PAGE、WB、IP 及酶活測定，也可用 BCA 法或 Bradford 法測定蛋白濃度，預(yù)期獲得的線粒體蛋白濃度約 10-20 mg/mL。

注意事項：1. 若要制備線粒體蛋白樣品，需在Mitochondria Isolation Reagent 及 Mitochondria Lysis Buffer 中加入 PMSF，且 PMSF 一定要在試劑加入樣品前1-2 min 內(nèi)加入，防止 PMSF 失效。2. 整個實驗在冰上或 4oC 進(jìn)行。所用溶液需冰浴或 4oC 預(yù)冷。3. 本實驗獲得的線粒體樣品若不能及時使用，建議 -80oC 保存。凍存后的線粒體不建議用于膜電位的檢測。4. PMSF 對人體有害，使用時務(wù)必小心。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

熱銷產(chǎn)品：DOTA-tri(t-butyl ester)  | Tranexamic acid  | AMTB (hydrochloride)  | 8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine  | Methylprednisolone succinate (sodium)  | CH6953755  | Biotin-HPDP  | Pyridoxal phosphate  | Herbacetin  | SMIP004

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