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蛋白L瓊脂糖

MCE 國際站：Protein L Agarose

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：2-8°C，禁止凍結(jié)，2 年有效

簡介：MCE Protein L Agarose 是用于一步分離、純化含 kappa 輕鏈抗體的親和層析介質(zhì)。

概述：MCE Protein L Agarose 是用于分離、純化抗體的親和層析介質(zhì)。Protein L 最早發(fā)現(xiàn)于大消化鏈球菌（Peptostreptoccus magnus）細(xì)胞壁中，可通過 kappa 輕鏈和哺乳動物的免疫球蛋白結(jié)合。重組 Protein L 含有 5 個免疫球蛋白（Ig）結(jié)合位點(diǎn)。與 Protein A、Protein G 相比，具有更廣譜的 Ig 結(jié)合能力，幾乎可結(jié)合所有含有 kappa 輕鏈的 Ig（IgG、IgM、IgA、IgE 和 IgD）及單鏈可變片段（scFv）和 Fab 片段。MCE Protein L Agarose 以高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學(xué)方法偶聯(lián)了重組 Protein L，可從動物腹水、血清、細(xì)胞分泌液上清等生物體液中一步分離、純化 IgG 等。本品儲存于 20% 乙醇中，每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前，需將 Protein L Agarose 充分重懸混勻后吸取。

描述：

蛋白 L 是一種由大消化鏈球菌表達(dá)的免疫球蛋白 κ 輕鏈結(jié)合蛋白。 Protein L 比 Protein A、Protein G 能結(jié)合更廣泛的免疫球蛋白種類和亞類，能結(jié)合所有種類的免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA、IgE 和 IgD），也能結(jié)合單鏈可變區(qū)片段（Scfv）和 Fab 片段。

MCE Protein L 瓊脂糖是一種 4% 高度交聯(lián)的瓊脂糖試劑，與重組 Protein L 偶聯(lián)，可有效純化具有 kappa 輕鏈的哺乳動物單克隆和多克隆抗體。

操作說明：1. Buffer 的準(zhǔn)備建議用高純水配制 Buffer，且配制后通過 0.45 μm 濾膜過濾除菌。2. 樣品處理：(1) 為了確保抗體樣本能夠高效結(jié)合在 Protein L Agarose 上，需要用平衡緩沖液稀釋血清、腹水等，比例至少為 1:1；或者把樣本放在平衡緩沖液中透析過夜。(2) 樣品在上樣前離心或用 0.45 μm 濾膜過濾，可減少雜質(zhì)、提高抗體純化效率、防止堵塞柱子。3. Protein L Agarose 的裝填：(1) 用去離子水沖洗柱底篩板，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水。(2) 將 Protein L Agarose 懸浮混勻，小心地將漿液連續(xù)倒入柱管中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。(3) 打開柱底部出口，最初讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速 1 mL/min，這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，也可以得到很好的裝填效果。標(biāo)記柱床高度。4. 樣品純化：(1) 平衡：使用至少 5 倍柱體積的平衡緩沖液平衡層析柱，讓緩沖液緩慢流出，流速大約為 1 mL/min。(2) 上樣：利用泵或注射器上樣。讓樣品緩慢流出，流速大約為 0.5-1 mL/min，收集流出液。如有必要，可以重復(fù)或循環(huán)上樣以提高得率。(3) 洗雜：用平衡緩沖液沖洗柱子，流速大約為 2 mL/min，直到 OD280 紫外吸收達(dá)到一個穩(wěn)定的基線（一般 15-30 倍柱體積），收集流出液。(4) 洗脫：洗雜完畢后，用 10-15 倍柱體積的洗脫緩沖液洗脫柱子，流速大約為 1 mL/min，收集洗脫液，并立刻加入中和緩沖液（1/10 洗脫液體積）調(diào)節(jié) pH 到 7.4。(3) SDS-PAGE 檢測：將純化得到的抗體樣品（包括流出組分、洗雜部分和洗脫部分）以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。5. 填料再生：使用 10 倍柱體積的鹽酸胍溶液（6 M，pH 8.0）或洗脫緩沖液清洗，然后立即用 5 倍柱體積的平衡緩沖液清洗。Protein L Agarose 能夠重復(fù)再生 10 次，而不會有明顯的吸附量下降。6. 填料儲存：Protein L Agarose 需保存在含有 20% 乙醇的平衡緩沖液中，2-8°C 保存，嚴(yán)禁凍結(jié)。

注意事項(xiàng)：1. 請勿干燥或冷凍本產(chǎn)品，以免引起效價降低，降低純化效率。2. Protein L 親和層析介質(zhì)的靜態(tài)吸附能力 >15 mg 人 IgG/mL 介質(zhì)，其動態(tài)吸附能力會受到目的抗體濃度、上樣流速等因素影響而產(chǎn)生變化。3. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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