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蛋白A瓊脂糖

MCE 國際站：Protein A Agarose

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：2-8°C，禁止凍結(jié)，2 年有效

簡介：MCE Protein A Agarose 以高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學(xué)方法定向、高效偶聯(lián)了重組 Protein A，可從動(dòng)物腹水、血清、細(xì)胞分泌液上清等生物體液中一步分離、純化 IgG 等。

概述：MCE Protein A Agarose 是用于分離、純化抗體的通用型親和層析介質(zhì)。Protein A 是從金黃色葡萄球菌中分離出來的胞壁蛋白，能與哺乳動(dòng)物的免疫球蛋白 G (IgG) 重鏈 Fc 段結(jié)合。此外，和 Protein G 不同，Protein A 還可以與人的 IgE、IgM 等結(jié)合。天然的 Protein A 有 5 個(gè) IgGs 結(jié)合位點(diǎn)，同時(shí)還有許多功能未知的結(jié)構(gòu)域。重組 Protein A 只保留了 IgGs 結(jié)合位點(diǎn)，大大減少了非特異性吸附。MCE Protein A Agarose 以高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學(xué)方法定向、高效偶聯(lián)了重組 Protein A，可從動(dòng)物腹水、血清、細(xì)胞分泌液上清等生物體液中一步分離、純化 IgG 等。本品儲(chǔ)存于 20% 乙醇中，每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前，需將 Protein A Agarose 充分重懸混勻后吸取。

描述：

蛋白 A 是從金黃色葡萄球菌中分離出來的一種細(xì)菌細(xì)胞壁蛋白，主要通過 Fc 區(qū)與大多數(shù)哺乳動(dòng)物 IgG 結(jié)合。天然蛋白 A 含有 5 個(gè) IgG 結(jié)合域和許多其他功能未知的域。后者已從重組蛋白 A 中消除，以減少非特異性結(jié)合。

MCE 蛋白 A 瓊脂糖是一種與重組蛋白 A 偶聯(lián)的 4% 高度交聯(lián)瓊脂糖試劑，可有效純化哺乳動(dòng)物單克隆和多克隆抗體，例如人 IgG、IgE、IgM。

操作說明：1. Buffer 的準(zhǔn)備建議用高純水配制 Buffer，且配制后通過 0.45 μm 濾膜過濾除菌。2. 樣品處理：(1) 為了確?？贵w樣本能夠高效結(jié)合在 Protein A Agarose 上，需要用平衡緩沖液稀釋血清、腹水等，比例至少為 1:1；或者把樣本放在平衡緩沖液中透析過夜。(2) 樣品在上樣前離心或用 0.45 μm 濾膜過濾，可減少雜質(zhì)、提高抗體純化效率、防止堵塞柱子。3. Protein A Agarose 的裝填：(1) 用去離子水沖洗柱底篩板，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水。(2) 將 Protein A Agarose 懸浮混勻，小心地將懸液連續(xù)倒入柱管中。借助玻璃棒沿著柱壁倒入懸液可減少氣泡的產(chǎn)生。(3) 打開柱底部出口，最初讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速 1 mL/min，這樣可避免液壓對(duì)所形成柱床的沖擊，也可以得到很好的裝填效果。標(biāo)記柱床高度。4. 樣品純化：(1) 平衡：使用至少 5 倍柱體積的平衡緩沖液平衡層析柱，讓緩沖液緩慢流出，流速大約為 1 mL/min。(2) 上樣：利用泵或注射器上樣。讓樣品緩慢流出，流速大約為 0.5-1 mL/min，收集流出液。如有必要，可以重復(fù)或循環(huán)上樣以提高得率。(3) 洗雜：用平衡緩沖液沖洗柱子，流速大約為 2 mL/min，直到 OD280 紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線（一般 15-30 倍柱體積），收集流出液。(4) 洗脫：洗雜完畢后，用 10-15 倍柱體積的洗脫緩沖液洗脫柱子，流速大約為 1 mL/min，收集洗脫液，并立刻加入中和緩沖液（1/10 洗脫液體積）調(diào)節(jié) pH 到 7.4。(3) SDS-PAGE 檢測(cè)：將純化得到的抗體樣品（包括流出組分、洗雜部分和洗脫部分）以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測(cè)純化效果。5. 填料再生：使用 10 倍柱體積的鹽酸胍溶液（6 M，pH 8.0）或洗脫緩沖液清洗，然后立即用 5 倍柱體積的平衡緩沖液清洗。Protein A Agarose 能夠重復(fù)再生 10 次，而不會(huì)有明顯的吸附量下降。6. 填料儲(chǔ)存：Protein A Agarose 需保存在含有 20% 乙醇的平衡緩沖液中，2-8°C 保存，嚴(yán)禁凍結(jié)。

注意事項(xiàng)：1. 請(qǐng)勿干燥或冷凍本產(chǎn)品，以免引起效價(jià)降低，降低純化效率。2. Protein A 親和層析介質(zhì)的靜態(tài)吸附能力 >20 mg 人 IgG/mL 介質(zhì)，其動(dòng)態(tài)吸附能力會(huì)受到目的抗體濃度、上樣流速等因素影響而產(chǎn)生變化。3. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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