谷胱甘肽瓊脂糖
MCE 國際站:Glutathione Agarose
品牌:MedChemExpress (MCE)
存儲條件:2-8°C,2 年
簡介:Glutathione Agarose 以高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì),可實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量,高純度的 GST 標(biāo)記蛋白的純化。
概述:MCE Glutathione Agarose 是 GST 標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì),可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等,能夠簡單、快速、高特異性地對 GST 標(biāo)簽蛋白進(jìn)行純化。MCE Glutathione Agarose 以高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì),通過化學(xué)方法共價(jià)結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成。MCE Glutathione Agarose 可以用于純化細(xì)菌、哺乳動物細(xì)胞、昆蟲及桿狀病毒等各表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的重組衍生物。本品儲存于 20% 乙醇中,每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前,需將介質(zhì)充分重懸混勻后吸取。融合有 GST 標(biāo)簽的重組蛋白可以與 Glutathione Agarose 親和介質(zhì)特異結(jié)合,其他蛋白無法結(jié)合而被洗雜步驟清除。洗滌后,GST 標(biāo)簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫,從而被分離純化。
描述:
MCE 谷胱甘肽瓊脂糖是一種 4% 高度交聯(lián)的瓊脂糖試劑,可有效純化各種規(guī)模的高水平過表達(dá) GST 標(biāo)記融合蛋白。MCE 谷胱甘肽瓊脂糖具有高蛋白結(jié)合能力和穩(wěn)定性,并且與多種化學(xué)品和 pH 值兼容,使其成為高效純化大腸桿菌、酵母、昆蟲和哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的 GST 標(biāo)記融合蛋白的理想選擇。
操作說明:4.1 Buffer 的準(zhǔn)備4.2 樣品處理樣品在上樣前建議離心或用 0.22 μm 或者 0.45 μm 濾膜過濾,減少雜質(zhì),提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。4.3 Glutathione Agarose 的裝填(1) 用去離子水沖洗柱底篩板,確保柱底篩板上無氣泡,關(guān)閉柱底出口,并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水。(2) 將 Agarose 懸浮混勻,小心地將漿液連續(xù)地倒入柱管中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。(3) 打開柱底部出口,最初讓緩沖液緩慢流過層析柱,然后緩慢增加至最終流速,這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊,得到很好的裝填效果。當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后,在最后的裝柱流速下至少再上 3 倍柱體積的去離子水。標(biāo)記柱床高度。(4) 關(guān)閉柱底部出口。4.4 樣品純化(1) 平衡:使用至少 5 倍柱體積的平衡/洗滌緩沖液平衡層析柱。(2) 上樣:利用泵或注射器上樣。為了避免堵塞層析柱,樣品應(yīng)經(jīng)離心或使用濾膜 (0.22 μm 或 0.45 μm)過濾。(3) 洗雜:用平衡/洗滌緩沖液沖洗柱子,直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線 (一般至少 10-15 倍柱體積),收集流出組分和洗雜部分。(4) 洗脫:用 5-10 倍柱體積的洗脫緩沖液洗脫柱子,收集洗脫液,即目的蛋白組分。(5) SDS-PAGE 檢測:將純化得到的樣品 (包括流出組分、洗雜部分和洗脫部分)以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。4.5 填料清洗(1) 去除沉淀和一些變性物質(zhì):使用 2 倍柱體積的 6 M 鹽酸胍溶液清洗,然后立即用 5 倍柱體積的 PBS (pH 7.4)清洗。(2) 去除疏水性結(jié)合物質(zhì):使用 3-4 倍柱體積的 70% 乙醇或 2 倍柱體積的 1% Triton X-100 清洗,然后立即用 5 倍柱體積的 PBS (pH 7.4)清洗。
注意事項(xiàng):(1) 請勿干燥或冷凍本產(chǎn)品,以免引起效價(jià)降低,降低純化效率。(2) 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。(3) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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