Anti-Flag 磁珠
MCE 國(guó)際站：Anti-Flag Magnetic Beads
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件：4℃ 2 年
簡(jiǎn)介：Anti-Flag Magnetic Beads 可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)。
概述：MCE Anti-Flag Magnetic Beads 由高質(zhì)量的鼠源 IgG1 單克隆抗體與氨基磁珠共價(jià)偶聯(lián)制備，具有較高的 Flag (DYKDDDDK) 標(biāo)簽融合蛋白加載容量(>0.6 mg 蛋白/mL)，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀 (IP) 實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品可以通過磁力架 (MCE 產(chǎn)品目錄號(hào)：HY-K0200) 或自動(dòng)分離儀器分離，實(shí)驗(yàn)便捷有效。本產(chǎn)品蛋白荷載量高，特異性強(qiáng)，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)。
描述：
Anti-Flag磁珠是基于氨基磁珠，粒徑為200nm，與高質(zhì)量識(shí)別Flag八肽序列（DYKDDDDK）的鼠IgG1單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)。
免疫沉淀時(shí)僅需少量磁珠，非特異性結(jié)合率低。
• 方便省時(shí)。
• 非特異性結(jié)合率低。
• 樣品損失極小。
• 蛋白結(jié)合能力高達(dá)0.6 mg/mL。
• 穩(wěn)定的一瓶解決方案。
操作說明：1. 磁珠預(yù)處理混懸 Anti-Flag Magnetic Beads，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架上磁性分離，棄上清。重復(fù)以上洗滌步驟 2 次。2. 樣品的結(jié)合在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 細(xì)胞裂解液，充分混懸，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育，室溫孵育 2 小時(shí)或者 4oC 條件下孵育過夜。置于磁力架上磁性分離，棄上清。注意：結(jié)合過程中，磁珠可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀，屬于正常現(xiàn)象，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 洗滌在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸磁珠，磁性分離，棄上清。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于 0.05 為止。注意：如上清液的 OD280 大于 0.05，適當(dāng)增加洗滌次數(shù)即可。4. 洗脫本說明書提供三種 Flag 標(biāo)簽蛋白洗脫方案，操作者可以根據(jù)后期檢測(cè)的需要選擇不同的洗脫方案。a. 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測(cè)。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻，95oC 加熱 5 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測(cè)。b. 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入50 μL的洗脫緩沖液A 混合均勻，室溫孵育 10 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析。c. 競(jìng)爭(zhēng)性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠體積的洗脫緩沖液 B混合均勻，室溫孵育 1 小時(shí)或者 4oC 條件下孵育 1-2 小時(shí)。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，即為目的蛋白，樣品用于后期功能分析。
注意事項(xiàng)：1. 本產(chǎn)品 pH 值為 6-8，禁止凍結(jié)。2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免離心、干燥或凍存，禁止長(zhǎng)時(shí)間置于磁場(chǎng)，可能會(huì)引起磁珠聚團(tuán)，操作過程應(yīng)輕柔，避免抗體脫落。3. 使用本產(chǎn)品進(jìn)行 IP 實(shí)驗(yàn)前，需先確認(rèn)樣品中 Flag 標(biāo)簽融合蛋白的表達(dá)情況。4. 為最大限度的降低蛋白質(zhì)降解，請(qǐng)配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 cocktails (MCE 產(chǎn)品目錄號(hào)：HY-K0010，HY-K0011)。5. 不要使用含有 dithiothreitol (DTT) 的細(xì)胞裂解液樣品，DTT 可能會(huì)引起磁珠上的 Flag 抗體脫落。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
常見問題：1. 檢測(cè)結(jié)果條帶背景過高？A. 可能是由于蛋白非特異性結(jié)合到抗體、磁珠或 EP 管上，建議對(duì)裂解液進(jìn)行預(yù)處理，去除非特異結(jié)合的蛋白；在最后一次洗滌前，轉(zhuǎn)移整個(gè)樣品到新的EP 管中，然后磁性分離或離心分離。B. 洗滌效果不佳，也會(huì)導(dǎo)致條帶較高的背景，建議增加洗滌時(shí)間與次數(shù)。2. 檢測(cè)結(jié)果無條帶？A. Flag 標(biāo)簽融合蛋白沒有表達(dá)可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果無條帶：建議操作：a. 確保目的蛋白帶有 Flag 標(biāo)簽；b. 制備新鮮的裂解液；c. 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?(如 MCE 的產(chǎn)品：HY-K0010，HY-K0011)。B. 孵育時(shí)間不足可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果無條帶，建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間。C. 裂解液中存在高濃度的 DTT或其他的還原劑等干擾物質(zhì)，建議選用合適的裂解液。
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