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Anti-HA 磁珠

MCE 國(guó)際站：Anti-HA Magnetic Beads (1 μm)

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：4°C 2 年

簡(jiǎn)介：MCE Anti-HA Magnetic Beads (1 μm) 用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 HA 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)。

概述：MCE Anti-HA Magnetic Beads 由高質(zhì)量的鼠源 IgG3a 單克隆抗體與氨基磁珠共價(jià)偶聯(lián)制備，具有較高的 HA 標(biāo)簽融合蛋白加載容量 ( >0.6 mg 蛋白/mL)，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 HA 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀 ( IP )。本產(chǎn)品可以通過(guò)磁力架 ( MCE 產(chǎn)品目錄號(hào): HY-K0200 ) 或自動(dòng)分離儀器分離，實(shí)驗(yàn)便捷有效。本產(chǎn)品蛋白核載量高，特異性強(qiáng)，也可用于免疫共沉淀 ( Co-IP ) 和小量的蛋白質(zhì)純化。

描述：

抗HA磁珠基于羥基磁珠，粒徑為1μm，與高質(zhì)量鼠IgG3a單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)，該單克隆抗體可識(shí)別源自人流感血凝素（HA）蛋白的HA表位標(biāo)簽（YPYDVPDYA）。

免疫沉淀過(guò)程中，僅需少量磁珠，非特異性結(jié)合率低。

•   方便省時(shí)。

•   非特異性結(jié)合率低。

•   樣品損失極小。

•   蛋白結(jié)合能力高達(dá)0.6mg/mL。

•   穩(wěn)定，一瓶解決方案。

操作說(shuō)明：1. 磁珠預(yù)處理混懸 Anti-HA Magnetic Beads，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架上磁性分離，棄上清。重復(fù)以上洗滌步驟 2 次。2. 樣品的結(jié)合在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 細(xì)胞裂解液，充分混懸，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育，室溫孵育 2 小時(shí)或者 4°C 條件下孵育過(guò)夜。置于磁力架上磁性分離，棄上清。注意：結(jié)合過(guò)程中，磁珠可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀，屬于正?，F(xiàn)象，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 洗滌在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸磁珠，磁性分離，棄上清。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次。4. 洗脫本說(shuō)明書(shū)提供三種 HA 標(biāo)簽蛋白洗脫方案，操作者可以根據(jù)后期檢測(cè)的需要選擇不同的洗脫方案。a. 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測(cè)。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻，95°C 加熱 5 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測(cè)。b. 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 50 μL 的洗脫緩沖液 A 混合均勻，室溫孵育 10 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析。c. 競(jìng)爭(zhēng)性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠體積的洗脫緩沖液 B混合均勻，室溫孵育 1 小時(shí)或者 4°C 條件下孵育 1-2 小時(shí)。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，即為目的蛋白，樣品用于后期功能分析。

注意事項(xiàng)：1. 本產(chǎn)品 pH 值為 6-8，禁止凍結(jié)。2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免離心、干燥或凍存，禁止長(zhǎng)時(shí)間置于磁場(chǎng)，可能會(huì)引起磁珠聚團(tuán)，樣品結(jié)合后操作過(guò)程應(yīng)輕柔，避免抗原脫落。3. 使用本產(chǎn)品進(jìn)行 IP 實(shí)驗(yàn)前，需先確認(rèn)樣品中 HA 融合蛋白的表達(dá)情況。4. 為最大限度的降低蛋白質(zhì)降解，請(qǐng)配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 Cocktail (MCE 產(chǎn)品目錄號(hào)：HY-K0010，HY-K0011) 。5. 不要使用含 dithiothreitol (DTT) 的細(xì)胞裂解液樣品，DTT 可能會(huì)引起磁珠上的 HA 抗體脫落。6. 本產(chǎn)品僅用于專業(yè)人員的科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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