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沙拉沙星快速檢測(cè)試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)蜂蜜、動(dòng)物組織(雞肉、豬肉、魚(yú)、蝦)、牛奶、奶粉和雞蛋等樣本中的沙拉沙星藥物(Sarafloxacin,SAR),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的沙拉沙星藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗沙拉沙星藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含沙拉沙星藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中沙拉沙星藥物的殘留量。
沙拉沙星快速檢測(cè)試劑盒技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,45min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
組織(雞肉、豬肉、魚(yú)、蝦)…………0.3ppb
蜂蜜 ……………………………………0.4ppb
牛奶 ……………………………………3ppb
奶粉 ……………………………………6ppb
雞蛋 ……………………………………3ppb
尿液 ……………………………………0.5ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
沙拉沙星…………………………………100%
2.5 樣本回收率:
組織(雞肉、豬肉、魚(yú)、蝦)…………85%±15%
蜂蜜 ……………………………………80%±15%
牛奶 ……………………………………82%±15%
奶粉 ……………………………………85%±15%
雞蛋 ……………………………………83%±15%
尿液 ……………………………………85%±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3 ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):100ppb…………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋) …………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋) ………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
5×復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說(shuō)明書(shū)………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個(gè)
樣本前處理
1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2 配液:
配液1:0.15M鹽酸溶液
取5ml濃鹽酸,加入去離子水混勻,定容至400ml。
配液2:樣本提取液
量取10ml 0.15M鹽酸溶液(配液1)加入到90ml無(wú)水乙腈中混合均勻。
配液3:復(fù)溶液
將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋(1份復(fù)溶液加4份去離子水),用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
配液4:工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
樣本前處理步驟:
1 動(dòng)物組織(雞肉、豬肉、魚(yú)、蝦)處理方法
1)稱2.0±0.05g 均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中;
2)加入8ml樣本提取液(配液2),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
3)取2ml清澈上層有機(jī)相至潔凈干燥的10ml玻璃試管中,50-60℃水浴氮?dú)獯蹈桑?/p>
4)加入1ml正己烷,振蕩2分鐘,再加1ml復(fù)溶液(配液3),振蕩30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;
5)去除上層正己烷,取下層水相50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):2 檢測(cè)下限:0.3ppb
蜂蜜處理方法
1)取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中,加6ml樣本提取液(配液2),振蕩5分鐘,使其充分溶解;
2)加入3ml復(fù)溶液(配液3),加入11ml二氯甲烷,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘;
3)吸去上層,取下層有機(jī)相8ml至干燥溶器中,50-60℃水浴氮?dú)獯蹈桑?/p>
4)用1ml復(fù)溶工作液溶解干燥的殘留物,再加入正己烷1ml混合30秒,室溫3000轉(zhuǎn)/分以上,離心5分鐘;
5)去除上層取下層50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):2 檢測(cè)下限:0.4ppb
牛奶處理方法:
1)取25µl樣本液與475µl復(fù)溶液(配液3)混合,振蕩1分鐘,使其充分溶解;
2)取50µl液體用于分析。