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廈門逸漠生物科技有限公司

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類器官技術(shù)攻克新領(lǐng)域丨逸漠生物iPSC誘導內(nèi)耳類器官

閱讀:148      發(fā)布時間:2024-1-24
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前言

內(nèi)耳是聽力系統(tǒng)的重要組成部分,負責感知聽力和平衡功能,一旦損傷將會造成不可逆的危害。人多能干細胞經(jīng)誘導分化為內(nèi)耳類器官,在內(nèi)耳模擬發(fā)育、基因治療、建立疾病模型和藥物篩選方面發(fā)揮重要作用,有利于對內(nèi)耳發(fā)育和生理學的了解,能迅速推進對內(nèi)耳相關(guān)疾病的治療。

逸漠生物研制的Advanced-diff系列內(nèi)耳類器官試劑盒能在體外短時間內(nèi)誘導生成類器官,并且讓成熟的內(nèi)耳類器官具有神經(jīng)膠質(zhì)細胞環(huán)繞,大大縮短內(nèi)耳類器官的培養(yǎng)時間,加速研究效率,推進對內(nèi)耳類器官的探索。

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Advanced-diff系列內(nèi)耳類器官試劑盒是專用于誘導人多能干細胞分化為內(nèi)耳類器官的培養(yǎng)試劑盒,包含了適合Advanced-diff系列內(nèi)耳類器官生長的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、成熟培養(yǎng)基及誘導細胞分化所需的添加物,即買即用,不含動物源成分。



產(chǎn)品相關(guān)信息



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01
產(chǎn)品優(yōu)勢


無動物源成分,操作簡單,使用方便,誘導的內(nèi)耳類器官能產(chǎn)生耳泡結(jié)構(gòu),在60天左右可觀察到感覺毛細胞生成。


02
操作流程

分化第-2天

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當人多能干細胞匯合度達到75%-80%左右開始誘導分化為內(nèi)耳類器官,分化第-2天使用EB形成培養(yǎng)基誘導EB形成。分化第-1天,每孔加入100 μL EB形成培養(yǎng)基,使每孔體積為200 μL。圖片

分化第0天

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吸棄培養(yǎng)基,加入100 μL/孔基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+補充劑A誘導EB分化,用排槍輕輕吹打,使EB懸浮。在37℃CO2,5%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天。

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分化第4天

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基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+補充劑B混合均勻,按每孔25μl,加到96孔板中,并輕輕移液8-10次混勻,使每孔培養(yǎng)基的終體積為125μl,將96孔板放回培養(yǎng)箱,37℃,5%CO2孵育4天。圖片

分化第8天

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基礎(chǔ)培養(yǎng)基1+補充劑C混合均勻,按每孔25 μL,加到96孔板中,并輕輕移液8-10次混勻,使每孔培養(yǎng)基的終體積為150 μL,將96孔板放回培養(yǎng)箱,37℃,5%CO2孵育4天。圖片

分化第12天

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EB誘導結(jié)束,準備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基2(提前在冰上冷藏至少30min);或者,在d11上使基礎(chǔ)培養(yǎng)基2存儲在4°C過夜。Matrigel提前與4℃解凍,然后加入冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基2中,反復吹打溶解Matrigel,然后再培養(yǎng)基和Matrigel混合溶液中加入補充劑D,混合均勻,加熱到rt。將96孔板中的聚集物轉(zhuǎn)移到100mm培養(yǎng)皿中,用1-2mL的DPBS洗滌聚集體2次,再用1mL的混合培養(yǎng)基洗滌1次,然后加入10ml混合培養(yǎng)基,將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中,37℃,5%CO2 孵育3天;D15吸掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,重新加入不含Matrigel的混合培養(yǎng)基,繼續(xù)孵育3天,誘導耳泡形成。圖片

分化第18-60天

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內(nèi)耳類器官逐漸成熟,將培養(yǎng)基換成成熟培養(yǎng)基,開始長期培養(yǎng),每5天換一次液,到60天左右獲得具有感覺毛細胞的成熟內(nèi)耳類器官。圖片



鑒定

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