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人皮膚成纖維細胞常見的幾種培養(yǎng)方法您都了解嗎?

閱讀:571      發(fā)布時間:2023-2-6
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  人皮膚成纖維細胞胞體較大,胞質(zhì)弱嗜堿性,胞核較大呈橢圓形,染色質(zhì)疏松著色淺,核仁明顯。電鏡下,其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達的高爾基復(fù)合體,表明它具有合成和分泌蛋白質(zhì)的功能。
 
  人皮膚成纖維細胞的培養(yǎng)方法:
 
  1.分離培養(yǎng)
 
  成纖維細胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用,而主要是用于研究細胞的老化、各種外來因子對細胞的損傷、細胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細胞易于獲取,又易于在體外生長,皮膚成纖維細胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運用,其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對成熟,對其體外生長規(guī)律也有了較全面的認識。
 
  2.原代培養(yǎng)
 
  成纖維細胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法,其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常,以酶消化法獲得的成纖維細胞懸液在接種后5~10min即可見細胞以偽足初期附著,與底物形成一些接觸點;然后細胞逐漸呈放射狀伸展,胞體的中心部分亦隨之變扁平;較快者大約在接種后30min,細胞貼附底物即較為全,呈現(xiàn)成纖維細胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2~3天到1周左右,在接種的皮膚組織塊周圍長出細胞。待細胞融合成片,鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時即可進行傳代。一般都采用胰蛋白酶(trypsin),將成纖維細胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細胞分裂時變?yōu)榍蛐?分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平細胞。體外培養(yǎng)的成纖維細胞,其生命期限與物種等因素有關(guān)。

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