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　　HUVEC人臍靜脈內皮細胞是一種來源于臍帶組織的干細胞，它是臍靜脈的重要組成細胞之一，理論上能夠進行無限的傳代。因此在進行血管內皮細胞實驗的時候，經(jīng)常用人臍帶靜脈內皮細胞，而不是選擇靜脈血管內皮細胞或者動脈血管內皮細胞。臍靜脈內皮細胞的取材較為容易，來源較為充足，有提供包括產(chǎn)品、服務在內的廠家，因此在血管內皮的研究中經(jīng)常應用臍靜脈內皮細胞。
 

　　HUVEC人臍靜脈內皮細胞的使用說明：
 

　　一、細胞復蘇：
 

　　從液氮中取出細胞凍存管，迅速放入37℃水浴中解凍至管內殘留一點冰屑。用75%酒精擦拭凍存管后，將內容物吸至一15ml無菌離心管中，逐滴加入預溫至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混勻，室溫1500rpm離心10分鐘棄上清。再用RPMI-1640培液4-5ml洗滌一次，離心后棄上清，加HUVEC培養(yǎng)液4-5ml備用，每支HUVEC凍存管含細胞量為5×10個。
 

　　二、細胞接種和培養(yǎng)：
 

　　1、細胞接種:
 

　　(1)、包被液:用去離水配制0.5%明膠溶液，過濾除菌。
 

　　(2)、培養(yǎng)瓶包被:取2-4個T25培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶加2-3ml0.5%明膠溶液，搖勻使包被液布滿培養(yǎng)瓶底面，置37℃2小時或放置過夜。
 

　　(3)、接種細胞:接種前吸凈包被液，按2500-5000個細胞/cm接種細胞(1支5×10個細胞可接種2-4個培養(yǎng)瓶)，每瓶加培養(yǎng)液3-5ml,搖勻后置37℃5%CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24小時，此時細胞已貼壁，更換培養(yǎng)液后繼續(xù)在37℃5%CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。
 

　　(4)、擴大培養(yǎng):一般每周更換培養(yǎng)液2次，至細胞長至覆蓋培養(yǎng)面的70-80%可進行傳代或凍存。
 

　　三、消化細胞：
 

　　消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank'S液，分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液，用前按1:1混合。在細胞傳代或凍存前先消化細胞。具體操作如下:吸凈培養(yǎng)液，每瓶加消化液1ml，搖勻使其布滿培養(yǎng)瓶細胞面。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細胞回縮成圓形后，輕輕震動使絕大部細胞脫落后，每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用，并用吸管輕輕吹打培養(yǎng)面使細胞脫落后，吸至15ml無菌離心管內。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清，再用中和液洗滌細胞，離心棄上清，加適量RPMI-1640液，混勻后取10ul細胞懸液加10ul臺盼藍混勻后作細胞計數(shù)，按需要做步驟四或五。