小鼠Snail蛋白(SNAI)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗ti，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，

組成結(jié)構(gòu)

1、血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、2、血漿：EDTA、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

小鼠Snail蛋白(SNAI)elisa試劑盒

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后，為保證檢測(cè)效果，需要根據(jù)說(shuō)明書(shū)中保存條件正確儲(chǔ)存。除非特別注明，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲(chǔ)存

2. 在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，請(qǐng)確認(rèn)包裝中的試劑盒成分與說(shuō)明書(shū)一致，再進(jìn)行后續(xù)操作

3. 溶解標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)程中，注意標(biāo)準(zhǔn)品是否受潮，過(guò)程中要避免產(chǎn)生泡沫

4. 為了避免交叉污染，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時(shí)，正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性

6. 正確洗板有助于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應(yīng)為無(wú)色，請(qǐng)避光保存。加入孔板后，將由無(wú)色變成不同程度的藍(lán)色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致，加入終止液，溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色，即表明終止液與底物未混勻，請(qǐng)充分混合

實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測(cè)樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法:

一、試劑

1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證",每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素:包括類因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;

類因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

③檢測(cè)抗原時(shí),可用2-巰ji乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;

補(bǔ)體的控制方法:

①用EDTA稀釋標(biāo)本;

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;

2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等;

控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過(guò)久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。

 一般來(lái)講，96T能檢測(cè)90個(gè)樣本，48T能檢測(cè)42個(gè)樣本，這里面需要用標(biāo)樣來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以各位需要做實(shí)驗(yàn)的老師們，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買ELISA試劑盒的時(shí)候注意，需要做多少個(gè)樣本，在決定買多大規(guī)格的試劑盒，以免做實(shí)驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費(fèi)！

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