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一. 檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被載脂蛋白E（apo-E）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的載脂蛋白E（apo-E）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

二. 樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

三. 自備物品：

1.      酶標(biāo)儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

四. 實(shí)驗(yàn)用人載脂蛋白E(apo-E)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟：
【標(biāo)準(zhǔn)品的加樣】：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。
【加樣】：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
【加酶】：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
【測(cè)定】：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

五. 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.     樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染。要注意避免出現(xiàn)溶血

2.     本公司提供的96孔酶標(biāo)板是單條可拆卸型酶標(biāo)板，用戶按需求使用；剩余的酶標(biāo)板請(qǐng)按保存條件貯存。在操作過程中避免酶標(biāo)板干燥，干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。

3.     洗板不正確能夠?qū)е虏坏男Ч?。在加入底物盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔單調(diào)掉。

4.     任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的激烈氣體。任何漂白成份都會(huì)損壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

六.實(shí)驗(yàn)用人載脂蛋白E(apo-E)ELISA檢測(cè)試劑盒質(zhì)量保證及售后服務(wù)：

一、買方嚴(yán)格按照盒子上注明的貯藏條件貯藏，因買方對(duì)產(chǎn)品保管不當(dāng)而產(chǎn)生的產(chǎn)品質(zhì)量問題由買方負(fù)責(zé)。

二、特別提示：我司出售的試劑盒均為科研試劑，嚴(yán)禁用于臨床診斷。

三、因運(yùn)輸造成的貨物損壞，由賣方與運(yùn)輸方協(xié)調(diào)解決，買方不承擔(dān)由此產(chǎn)生的損失。因不可抗力因素造成我司延期交貨或無法交貨的，我司將及時(shí)通知買方并給出解決方案。

四、試劑盒保證質(zhì)量，保質(zhì)期半年，請(qǐng)注意時(shí)效，在保質(zhì)期內(nèi)用完。我司提供業(yè)技術(shù)支持，如實(shí)驗(yàn)有任何不明白的地方可以直接聯(lián)系我司技術(shù)人員。