樣品收集、處理及保存方法：植物CYP450酶聯(lián)免疫(ELISA檢測(cè))試劑盒

1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

（植物處理方案）

1、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心?，如無液氮，剪碎，玻璃勻漿器研磨也可；

2、 加入樣品體積9倍（鮮重：勻漿液體積）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 請(qǐng)于4℃ ，3000rpm，離心10min，收集上清；

4、 取上清檢測(cè)。

注：標(biāo)本均應(yīng)密封保存，短期內(nèi)使用（1周左右），可4度保存；若樣本收集與實(shí)驗(yàn)時(shí)間相隔較長，務(wù)必保存在-20或-80度，盡量不要超過半年，同時(shí)避免反復(fù)凍融。

植物CYP450酶聯(lián)免疫(ELISA檢測(cè))試劑盒性能：

準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于10 U/mL。

特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1） 充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96板孔，以保證混勻。

2） TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑或金屬，否則容易失效。

3） 加樣時(shí)請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產(chǎn)生。

4） 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。

5） 洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

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