大鼠AMPA離子能谷氨酸受體1 （ELISA）試劑盒

預(yù)防措施

ELISA試劑盒檢測(cè)時(shí)的注意事項(xiàng)

1. ELISA 實(shí)驗(yàn)的一般規(guī)則

1、為保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%。可用水和電子天平測(cè)定。但最好請(qǐng)專業(yè)人士糾正。

2、可配20ul、50ul、100ul、1000ul各一支槍。吸出不同的液體后，更換移液器吸頭。即使在吸氣標(biāo)準(zhǔn)時(shí)。

3. 實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，讓所有試劑回到室溫，使結(jié)果更穩(wěn)定。

4. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，基板應(yīng)避光。

5、用槍吸液體時(shí)，速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸不準(zhǔn)。

6、吸液時(shí)，請(qǐng)使用范圍接近所需量的槍，以減少誤差。

7、在酶標(biāo)孔中加入液體時(shí)，避免吸頭與孔內(nèi)液體接觸，使吸頭上的液滴與孔壁接觸，液滴自然流下。

8. 加完所有液體后，平行輕輕搖動(dòng)桌面上的ELISA板30秒，使液體混合。也可以使用酶標(biāo)儀的搖動(dòng)功能。

9. 溫水浴時(shí)，用不干膠或膠帶紙將ELISA板密封，防止水分蒸發(fā)。

10、洗板時(shí)，每次加入洗劑后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更*。如果沒(méi)有洗板機(jī)，請(qǐng)?jiān)诔ヒ后w后在報(bào)紙或羊毛紙上將盤(pán)子拍干。

11、當(dāng)洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水配制PH7.4，0.02M磷酸鹽緩沖液，加入0.1% Tween 20作為洗液。加入1/1000的后可長(zhǎng)期保存。

12、基材對(duì)光敏感，使用前應(yīng)立即準(zhǔn)備。

13、檢測(cè)前，打開(kāi)酶標(biāo)儀，使其穩(wěn)定10分鐘以上。

14、底物有一定毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免。

15、待測(cè)樣品應(yīng)澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。

16、溫水浴時(shí)間應(yīng)符合試劑盒規(guī)定。

17、盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

18、結(jié)果有問(wèn)題的樣品，應(yīng)采用其他方法確認(rèn)。

可以總結(jié)為四個(gè)方面：

1. 用于定位各種細(xì)胞內(nèi)成分的免疫酶染色。

2.研究抗酶抗體的合成。

3. 出現(xiàn)少量免疫沉淀。

4、體液中抗原或抗體成分的定量檢測(cè)。

二、下面所提到的是針對(duì)我公司的ELISA產(chǎn)品會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法

1. 加入反應(yīng)終止液后，沒(méi)有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標(biāo)記物。

解決辦法：請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行。

b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。

c.原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請(qǐng)于操作步驟4，適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請(qǐng)用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過(guò)有效期限。

解決辦法：請(qǐng)更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。

b.原因：操作時(shí)間拖太久。

解決辦法：請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。

c.原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時(shí)，請(qǐng)小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。

解決辦法：請(qǐng)使用已校正過(guò)的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時(shí)，吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。

f.原因：洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。

解決辦法：請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板機(jī)洗板過(guò)程，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無(wú)法降低室內(nèi)溫度，請(qǐng)適當(dāng)縮短步驟4的溫育時(shí)間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍(lán)色，請(qǐng)不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時(shí)間超過(guò)太久。

解決辦法：請(qǐng)控制反應(yīng)時(shí)間。

d.原因：酶標(biāo)記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過(guò)的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標(biāo)記物與底物溶液)接觸過(guò)的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無(wú)殘留)

4. 陰性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值低于陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤(pán)四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(同2-f.)。

解決辦法：請(qǐng)參考2-f.

c.原因：添加樣品或酶標(biāo)記物的量不一致。

解決辦法： 請(qǐng)參考2-d.

該IBL試劑盒可用于小鼠血清、EDTA血漿和細(xì)胞上清液中IL-6的定量檢測(cè)

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