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貨物所在地:北京北京市
更新時(shí)間:2024-10-05 21:00:07
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ECL 超敏發(fā)光液
產(chǎn)品貨號:E1060
儲存條件: 4℃避光保存,一年有效。如果長期不用,可以-20℃保存。-20℃可以保存更長時(shí)間。
產(chǎn)品簡介
用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。具有以下特點(diǎn):
(1)具有極gao靈敏度和高信噪比,可檢測pg水平;
(2)可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;
(3)發(fā)光迅速,熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測,淬滅時(shí)間長;
(4)可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體;
(5)保存時(shí)間長;
使用說明
1、常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP 標(biāo)記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用 HRP 標(biāo)記 IgG 或用一抗-鏈親和素 -生物素-HRP 夾心法。核酸雜交膜用 HRP 標(biāo)記探針雜交,洗膜。
2、在最hou一次洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗的同時(shí),新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液 A 和 B 混合,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。
3、用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發(fā)光工作液充分接觸(約 0.125ml 發(fā)光工作液/cm2 膜)。室溫孵育 3 分鐘后,準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過長不會增加靈敏度,有時(shí)還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng),使用過少的發(fā)光工作液不利于反應(yīng)進(jìn)行,也會導(dǎo)致膜上 條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
4、用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
5、在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來*包 裹雜交膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋 雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),最hao蛋白帶面向上。
6、在黑暗中放入 X 感光膠片,分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
注意
1、步驟 1-5 可在日光燈下操作;但發(fā)光液暴露于強(qiáng)光下時(shí)間過久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作 可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的潔凈。
2、長時(shí)間曝光或蛋白質(zhì)過量,將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
3、發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶發(fā)光 較弱,肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上 可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使 X 膠片感光,因而弱帶可曝光 1-10 小時(shí)。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜, 重新孵育二抗,然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光。
4、由于超敏發(fā)光液的高靈敏度,強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗 1:1000-1:4000,二抗 1: 2000-1:5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導(dǎo)致失敗!
5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)會淬滅熒光,應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜,例如“克林萊"牌保鮮膜。
6、使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可幫助確定膠片上條帶的準(zhǔn)確位置 和大小。
7、NaN3能抑制 HRP 活性,回收二抗時(shí)應(yīng)避免使用 NaN3,如必需使用勿超過 0.01%。
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注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本品僅用于實(shí)驗(yàn)研究。
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