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4XSDS分離膠緩沖液（pH8.8)

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產(chǎn)品說(shuō)明：

本試劑為配制SDS-PAGE分離膠緩沖液，可用于配制各種濃度的變性PAGE凝膠，方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS，使用時(shí)不用另外加入。

操作步驟(僅供參考)：

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，最佳膠濃度請(qǐng)參考附表。

灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表)

1、參照凝膠模具說(shuō)明書，裝配好凝膠模具。  

2、將不同體積的30%丙烯酰胺/甲叉29:1 、分離膠緩沖液和蒸餾水在小燒杯或試管中混合。

3、加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4、在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端 1.5 cm或距梳齒約0.5cm即可)。

5、靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

灌制濃縮膠

1、小心傾倒出覆蓋在分離膠上的水層。  

2、將不同體積的30%丙烯酰胺/甲叉29:1 、分離膠緩沖液和蒸餾水在一個(gè)小燒杯或試管中混  合。  

3、加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4、將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

5、將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

6、靜置，等待濃縮膠聚合。  

7、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

進(jìn)行常規(guī)電泳操作。

注意：

TEMED和10%過(guò)硫酸銨溶液最后加，在加入之前需混勻前面所加試劑。10%過(guò)硫酸銨在4度有限期為一周，TEMED容易揮發(fā)，使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。在常溫下膠30分鐘內(nèi)可以凝固，如溫度過(guò)低，可放37度溫箱凝固。灌完分離膠后，輕輕的加1ml ddH2O封上層，凝固后可見(jiàn)到分界線。灌濃縮膠時(shí)先傾去水層。灌濃縮膠后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后，放入電泳液中（讓電泳液漫過(guò)加樣孔），輕輕拔出梳子。

附表：

根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分離膠.

關(guān)于SDS-PAGE膠的配制，請(qǐng)參考

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