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EagI快速內切酶

產品貨號：F5535s

儲存條件：-20℃

同裂酶：BseX3I, BstZI, EclXI, Eco52I, XmaIII

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

產品組成

產品簡介

LabFD™快速內切酶是一系列經過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內精確完成DNA切割的高保真限制性內切酶，適用于質粒DNA、PCR產物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內切酶具有如下特點：5~15分鐘內即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體系；良好的酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有baifenzhi100活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體驗。

活性定義

37℃下，在20ul反應體系中，1ul酶能夠在15 min內*消化1ugλDNA (HindIII digest)。

建議反應條件

1×LabFD™緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA快速酶切流程"配制反應體系。

失活條件

80℃溫育20min。

質量控制

功能活性檢測

最shi反應溫度下，在20ul反應體系中，1ul LabFD™ EagI能夠在15min內*消化1ug  λDNA(HindIII digest)。

超長時間溫育檢測

最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ EagI與1ug λDNA(HindIII digest)共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最shi反應溫度下，使用1ul LabFD™ EagI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

非特異性內切酶活性檢測

最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ EagI與1ug超螺旋質粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。

藍白斑檢測

將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ EagI消化，重新連接后轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞，涂布在含有對應抗生素、IPTG和 X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產物會生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產物將得到白色菌落。對于 LabFD™ 系列限制酶而言，白色菌落比例應小于 1%。