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人解整合素樣金屬蛋白酶8ADAM8ELISA試劑盒
人解整合素樣金屬蛋白酶8ADAM8ELISA試劑盒

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更新時間:2024/8/4 21:00:06

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人解整合素樣金屬蛋白酶8ADAM8ELISA試劑盒
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人解整合素樣金屬蛋白酶8ADAM8ELISA試劑盒

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試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被病毒性腹瀉病毒抗體的包被微孔中,依次加入標本、HRP標記的檢測抗原,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450NM波長下測定吸光度(OD值),與 CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV)的存在與否。


二.方法類型和操作步驟
雙位點一步法
在雙抗體夾心法測定抗原時,如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體,則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步(圖15-5)。這種雙位點一步不但簡化了操作,縮短了反應時間,如應用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中,應注意鉤狀效應(hookeffect),類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成夾心復合物,所得結果將低于實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。
用途
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。然而,影響Elisa試驗結果的因素很多,故加強各個環(huán)節(jié)的質量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。

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