如何降低人細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率?我們知道做實(shí)驗(yàn)時(shí)出錯(cuò)是正常的,但如果做到以下這些可以減少錯(cuò)誤。
1、檢驗(yàn)技術(shù)員
應(yīng)具備實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器和儀器,有一定的總結(jié)和分析問題的能力,能夠及時(shí)妥善地解決實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況。
2、使用經(jīng)過校準(zhǔn)的微量移液器來消除自然誤差。移液器的準(zhǔn)確性對(duì)于定量檢測(cè)尤為重要。
3、仔細(xì)閱讀說明
嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行規(guī)范操作。不同批號(hào)人細(xì)胞ELISA試劑盒的試劑不能混用。值得改進(jìn)的地方,只有經(jīng)過反復(fù)測(cè)試和確認(rèn),才能改進(jìn)。
4、*清洗
如果板沒有*清洗,酶結(jié)合物的背景顏色會(huì)顯示假陽(yáng)性。洗滌液應(yīng)新鮮并立即制備。舊的洗滌液可能有較高的背景或假陽(yáng)性。
5、嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間
反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng),酶失活;如果反應(yīng)時(shí)間過短,酶聯(lián)物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,產(chǎn)物結(jié)構(gòu)松散不穩(wěn)定,容易洗掉,可能造成假陰性。
6、注意ELISA試劑盒的保質(zhì)期。超過保質(zhì)期的試劑不能使用。
7、評(píng)估試劑的實(shí)用性
試劑的穩(wěn)定性對(duì)準(zhǔn)確性極為重要。試劑使用前應(yīng)反復(fù)進(jìn)行陰、陽(yáng)性對(duì)照及樣品比對(duì)試驗(yàn),確定試劑符合要求后方可使用。
8、嚴(yán)格控制顯色時(shí)間
如果顯色時(shí)間過短,與終止液反應(yīng)終止后,底物偶聯(lián)物的量過少,容易出現(xiàn)假陰性。
如果超過規(guī)定時(shí)間顯色,則應(yīng)判斷為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān)。加入顯色劑后應(yīng)立即顯色,不得報(bào)告為陽(yáng)性,可能是背景顯色所致。
9、準(zhǔn)確快速添加樣品
如果加樣不準(zhǔn)確,酶產(chǎn)品的量就無法確定,人細(xì)胞ELISA試劑盒直接影響顯色結(jié)果。顯色深度和A值的測(cè)定與顯色劑和終止液的加入量有關(guān),加樣時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎。
對(duì)于要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣的實(shí)驗(yàn),加樣慢會(huì)出現(xiàn)誤差,而且試劑暴露時(shí)間過長(zhǎng),尤其是室溫過高時(shí),保存期會(huì)延長(zhǎng),被縮短甚至無效。