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產品簡介:
PEI線性轉染試劑是以一種陽離子高分子聚合物-聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)為載體的基因轉染試劑。PEI是在pH中性溶液中具有*正電荷密度的合成聚合物。帶正電的PEI與帶負電的DNA牢固結合,并賦予凈陽離子電荷,使DNA進入細胞。
應用范圍:能夠高效率轉染多種細胞系,包括貼壁細胞和懸浮細胞。
產品優(yōu)勢:低毒,高效;操作簡單,高性價比;具有可重復性的轉染結果;適用于快速、高通量轉染流程轉染步驟:
-以HEK293貼壁細胞為例,步驟如下:
1. 細胞接種:細胞密度2-6 x106 cells/mL.
2. 質粒的準備:在5%最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中,每10 6個細胞稀釋1.0 ug pDNA。
3. PEI的準備:在5%最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中,每10 6個細胞稀釋3.0 ug PEI Prime,混勻
4. 通過快速,短暫渦旋或顛倒數(shù)次試管,將pDNA和PEI Prime溶液混合在一起。
5. 使pDNA和PEI的混合物在室溫下靜置10分鐘。
6. 一邊旋轉板,一邊將pDNA和PEI混合物逐漸滴加到細胞中。
7. 于37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
轉染的優(yōu)化:
為達到高轉染效率和低細胞毒性的良好結果,可以進行如下優(yōu)化:
參數(shù) | 范圍 |
PEI濃度 | 3.50-6.50mg/(L final culture) |
DNA濃度 | 0.75-1.5mg/(L final culture) |
PEI/DNA混勻時間 | 5.0-15.0minutes |