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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 詳詢 |
貨號 | 詳詢 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
主要用途 | 科研 |
一、產(chǎn)品簡介
BrainBits小鼠小腦培養(yǎng)試劑盒,產(chǎn)品組分:1 個E18小鼠小腦、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1個帶橡膠球的火拋光移液、1對PDL涂層蓋板。
二、產(chǎn)品使用
(一)制劑(無菌罩室溫)
1. 將6mg無菌木瓜蛋白酶(PAP 6mg)溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中,制備細胞解離液,最終工作濃度為2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分鐘使其溶解。放入冰箱或冰中備用。組織和木瓜蛋白酶必須處于相同的溫度(根據(jù)處理組織的數(shù)量,可能需要幾個單位)。
2. 將80µl臺普蘭藍(Sigma T8154)加入0.5ml試管中進行第9步。
(二)細胞分散(無菌罩室溫):
1. 用2ml移液管,用最少的培養(yǎng)基小心地將組織轉移到木瓜蛋白酶上。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個新的無菌15ml試管中
保存到步驟3。
2. 組織與木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分鐘。輕輕地旋轉每2分鐘或使用加熱搖振板在30℃和150rpm。
3. 用2ml移液管從木瓜蛋白酶中除去帶有少量培養(yǎng)基的組織,并從步驟1中返回THRYVE胚胎wanquan培養(yǎng)基。
4. 使用硅化巴斯德移液器,將組織分散不超過10倍或90%,避免產(chǎn)生氣泡。可選:加入400µl 1mg/ml DNase I溶液(StemCell Technologies 07469)加入細胞漿液中,在室溫下孵育15分鐘,輕彈或旋轉。
5. 讓未分散的碎片靜置1分鐘。
6. 將含有分散細胞的上清液轉移到15ml無菌管中。留下約50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan體??蛇x用70µm濾池過濾細胞液。
7. 旋轉1100rpm (200 x G) 1分鐘。丟棄上清,留下含有微球的約50μl THRYVE胚胎wanquan液。
8. 分散細胞顆粒(用手指或管輕彈管底部),重懸于1ml NbActiv1™中。
9. 取20μl細胞液加入含有80μl臺盼藍(1:5稀釋)的0.5ml試管中,或按實驗室現(xiàn)行計數(shù)程序計數(shù)。
10. 使用血細胞計(計算細胞/ml)或使用當前的實驗室程序計數(shù)細胞。
(三)細胞電鍍(無菌罩室溫):
1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細胞,并以16,000個細胞/cm2或所需濃度進行板載。
2. 37℃,5% CO2, 9% O2, 95%濕度(或環(huán)境O2)孵育。
3. 4天后,神經(jīng)元顯示軸突和樹突;突觸和動作電位開始于7天。
4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。
(四)可行性分析:
1. 用37℃HBSS (0.2ml/cm2底物)沖洗兩次。
2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物,各稀釋15µl,加入1.5ml HBSS(1:100稀釋)。
3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物(1:10稀釋)。
4. 約1分鐘后,使用適合熒光素熒光的藍色激勵(綠色細胞)計數(shù)活細胞。用綠色激勵計數(shù)死細胞碘化丙啶熒光(小紅核)。
5. 生存能力=(綠色細胞/單位面積)/(總細胞數(shù)/單位面積)或生存=綠色細胞/(綠色+紅色細胞)。
三、產(chǎn)品目錄表
SKU | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品品牌 |
KTC57ECB | 小鼠小腦培養(yǎng)試劑盒 | Transnetyx Tissue BrainBits |
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