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卵巢癌3D類器官培養(yǎng)基產(chǎn)品說(shuō)明：卵巢癌類器官培養(yǎng)基（Ovarian Carcinoma Organoid Medium）是一種為促進(jìn)人源卵巢癌類器官體外形成和擴(kuò)增而開(kāi)發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個(gè)較優(yōu)的人源卵巢癌類器官體外培養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人源卵巢癌類器官的生長(zhǎng)。

卵巢癌3D類器官培養(yǎng)基產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明：
?  實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
（1）15mL無(wú)菌離心管、1.5mL離心管、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30min。
（2）提前30min從4℃冰箱取出卵巢癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫，提前1h從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?  卵巢癌類器官培養(yǎng)
（1）將獲取的卵巢癌原代細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，根據(jù)計(jì)算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中。
（2）補(bǔ)齊預(yù)冷的卵巢癌類器官培養(yǎng)基至所需體積，將預(yù)冷后的細(xì)胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作），使得卵巢癌原代細(xì)胞終濃度為5×106個(gè)細(xì)胞/毫升。
（3）然后將細(xì)胞與基質(zhì)膠的混合液按照50μL/孔呈半球形點(diǎn)膠于24孔板。
（4）將培養(yǎng)板放入5%CO2、37℃培養(yǎng)箱終至少30min，待基質(zhì)膠*凝固。沿孔壁每孔緩慢加入500μL預(yù)先恢復(fù)至室溫的類器官培養(yǎng)基，置5%CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
（5）3天后鏡下觀察類器官形成情況，粒徑大于30~50μm即認(rèn)為類器官已經(jīng)形成，每5天更換一次培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，持續(xù)觀察類器官大小，鏡下觀察大部分類器官大小均大于30~50μm目大小不再增大即可收集類器官進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
?  卵巢癌類器官收集
（1）棄培養(yǎng)基，每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑，室溫放置1min。
（2）輕輕吹打混勻，收集至15mL離心管中，50rpm恒溫震蕩解離10-20min，解離之后1500rpm離心3 min，輕輕吸去上清，待用。
?  卵巢癌類器官傳代
（1）收集的類器官，加入適量的消化酶，37℃，200rpm消化（具體時(shí)間根據(jù)類器官大小和數(shù)量決定，以肉眼可見(jiàn)顆粒明顯減小一半為準(zhǔn)，可中間取消化的類器官顯微鏡觀察，類器官消化至3~10個(gè)細(xì)胞集合體最佳）。
（2）消化*后1500rpm離心3min，棄上清，使用清洗液重懸后1500rpm離心3min。
（3）加入預(yù)冷的卵巢癌類器官培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，計(jì)數(shù)，按照培養(yǎng)步驟操作繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細(xì)胞比例越高（>50%），類器官培養(yǎng)成功率越高。3.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。
4.類器官培養(yǎng)過(guò)程要輕柔，避免基質(zhì)膠凝固后散膠。
5.為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。6.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
7.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。