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買到了BrainBits小鼠游離皮質(zhì)培養(yǎng)試劑盒后，該如何使用呢？

一、制劑（無菌罩室溫）：

1. 將80µl臺普蘭藍（Sigma T8154）加入0.5ml試管中進行下面的步驟4。

2. 12ml NbActiv1™至室溫。

3. 將2ml分離的初級神經(jīng)元管置于30℃水浴中加熱1分鐘。

二、細胞分散（無菌罩室溫）：

1. 用硅化巴斯德移液管，將整個試管的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無菌15ml離心管中。

2. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G)， 1分鐘。丟棄上清，留下約50µl含有微球的THRYVE胚胎wanquan液。

3. 分散細胞顆粒（用手指或管輕彈管底部），重懸于1ml NbActiv1™中。

4. 將20µl細胞液加入含有80µl臺盼藍（1:5稀釋）的0.5ml試管中。

5. 使用血細胞計（計算細胞/ml）或使用當前的實驗室程序計數(shù)細胞。

三、細胞電鍍（無菌罩室溫）：

1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細胞，用16000個細胞/cm2或所需濃度的平板。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育。

3. 4天后，神經(jīng)元顯示軸突和樹突；突觸和動作電位開始于7天。

4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

四、細胞鍍96孔板：

1. 用NbActiv1™以0.2ml/cm2稀釋細胞，并以10,000個細胞/孔（SD）和35,000個細胞/孔（C57/BL6）或所需的濃度進行平板稀釋

濃度。

2. 將鋼板放在工作臺頂部（而不是在引擎蓋下），并將邊緣用薄膜包裹15-20分鐘，使其均勻沉降。

3. 除去副膜，37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育。

4. 4天后，神經(jīng)元顯示軸突和樹突；突觸和動作電位開始于7天。

5. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

五、可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）沖洗兩次。

2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素的丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶的水原液配制染料混合物。

將每種15µl稀釋到1.5ml HBSS中（1:100稀釋）。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀釋）。

4. 約1分鐘后，使用適合熒光素熒光的藍色激勵（綠色細胞）計數(shù)活細胞。計數(shù)死細胞

綠色激發(fā)為碘化丙啶熒光（小紅核）。

5. 生存能力=（綠色細胞/單位面積）/（總細胞數(shù)/單位面積）或生存=綠色細胞/（綠色+紅色細胞）。

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