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參考價(jià)	面議

科研試劑盒

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50T
貨號(hào)	YLK10409P	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途	科研實(shí)驗(yàn)	保存條件	低溫運(yùn)輸，-20℃保存
有效期	12個(gè)月	試劑盒說(shuō)明	不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

支原體通用熒光探針?lè)≒CR定量檢測(cè)試劑盒支原體和親緣關(guān)系很近的無(wú)膽甾原體、螺旋體統(tǒng)稱霉形體。

詳細(xì)介紹

支原體通用熒光探針?lè)≒CR定量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱：支原體通用熒光探針?lè)≒CR定量檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Mycoplasmaspp.Probe qPCR Kit

支原體和親緣關(guān)系很近的無(wú)膽甾原體、螺旋體統(tǒng)稱霉形體。霉形體是目前發(fā)現(xiàn)的最小的、Z簡(jiǎn)單的原核生物。它們?nèi)狈?xì)胞壁、有變形能力、能通過(guò)濾菌器、可在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，成為細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的一種污染源，嚴(yán)重影響細(xì)胞生長(zhǎng)率、細(xì)胞形態(tài)、基因表達(dá)、細(xì)胞代謝和細(xì)胞活力。因此快速靈敏檢測(cè)支原體具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。

3.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高，引物是根據(jù)支原體高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他微生物的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。

6.本產(chǎn)品只能用于科研。

【試劑組成】

成份	包裝
2×Probe qPCR MagicMix	500 μL（本色蓋）
熒光 PCR 專用模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
支原體通用探針?lè)?qPCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
支原體通用 qPCR 探針	100 μL（棕色管）
支原體通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
核酸釋放劑	20 次（1mL、綠蓋）
使用手冊(cè)	1 份

【運(yùn)輸及保存】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

【自備試劑】樣品 RNA。

【注意事項(xiàng)】

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。

由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用

5.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性

對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。

8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌 DNA/提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的細(xì)菌 DNAout 或柱式細(xì)菌 DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次免 DNA 提取的核酸釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為 PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。其使用手冊(cè)可向本公司客服索取。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：

成份	樣品管 N+2 個(gè)	PCR陰性對(duì)照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
2×Probe qPCR MagicMix	10μL	10μL	各10μL
支原體通用 qPCR 探針	1ul	1ul	各2ul
支原體通用探針?lè)?qPCR 引物混合液	2 μL	2 μL	各2 μL
N+2 個(gè)待測(cè) DNA 模板	6ul	-	-
超純水	-	6μL	-
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7 號(hào)）	-	-	各 6μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…）

11.蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)）	60℃	1 min（采集 FAM 通道的熒光信號(hào)）

四、數(shù)據(jù)處理

12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽(yáng)性。