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更新時(shí)間：2024-07-18 12:42:43瀏覽次數(shù)：458評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | YLK10406P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 保存條件 | 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 |
| 有效期 | 12個(gè)月 | 試劑盒說(shuō)明 | 不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用 |
鼠疫耶爾森菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
產(chǎn)品名稱(chēng)：鼠疫耶爾森菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
英文名稱(chēng)：YersiniapestisProbe qPCR Kit
鼠疫耶爾森菌也叫做鼠疫桿菌（Yersiniapestis）是鼠疫的病原菌，鼠疫是一種人獸共患的自然疫源性烈性傳染病，人類(lèi)鼠疫多為疫鼠的跳蚤叮咬而感染， 是我國(guó)法定的甲類(lèi)傳染病。此菌引起的是嚙齒動(dòng)物中的自然疫源性疾病，傳染性強(qiáng)，病死率高，易釀成大流行，此菌主要累及皮膚和淋巴結(jié)，其次為敗血癥、肺炎、腦膜炎，對(duì)人體健康有較大危害，因此快速檢測(cè)鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)具 有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛?PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其 他病原 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
【試劑組成】
成分 | 包裝 |
2×Probe qPCR MagicMix | 500 μL（本色蓋） |
熒光PCR 專(zhuān)用模板稀釋液 | 1 mL（黃蓋） |
鼠疫耶爾森菌探針?lè)╭PCR 引物混合液 | 100 μL（白蓋） |
鼠疫耶爾森菌 qPCR 探針 | 50 μL（棕色管） |
鼠疫耶爾森菌探針?lè)╭PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1*10EB拷貝/ul） | 50 μL（黃蓋） |
使用手冊(cè) | 1 份 |
【運(yùn)輸及保存】
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。
【自備試劑】樣品 DNA。
【注意事項(xiàng)】
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原， 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震
蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性
對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA/提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好
后最后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰 性對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（2-7 管） |
2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
鼠疫耶爾森菌 qPCR 探針 | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
鼠疫耶爾森菌探針?lè)?qPCR 引物 混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 個(gè)待測(cè) DNA 模板 | 7 μL | - | - |
超純水 | - | 7 μL | - |
第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 （2-7 號(hào)） |
- |
- | 各 7 μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…） |
11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15sec |
60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的熒光 信號(hào)） |
四、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值
小于 40，擴(kuò)增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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