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參考價(jià)	面議

科研試劑盒

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50T
貨號(hào)	YLK10372P	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途	科研實(shí)驗(yàn)	英文名稱	Hepatitis B Virus(HBV) SYBR qPCR Kit
保存條件	低溫運(yùn)輸，-20℃保存	有效期	12個(gè)月
試劑盒說(shuō)明	不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

乙型肝炎病毒通用型染料法PCR試劑盒乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)會(huì)引起乙型病毒性肝炎，是一種以肝臟病變?yōu)橹鞯膫魅静　?

詳細(xì)介紹

乙型肝炎病毒通用型染料法PCR試劑盒

商品名稱：乙型肝炎病毒通用型染料法PCR試劑盒

Name ：Hepatitis B Virus(HBV) SYBR qPCR Kit

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)會(huì)引起乙型病毒性肝炎，是一種以肝臟病變?yōu)橹鞯膫魅静?。臨床上以食欲減退、上腹部不適、肝區(qū)痛、乏力為主要表現(xiàn)。部分患者可有黃疸發(fā)熱和肝大伴有肝功能損害，有些患者可慢性化，甚至發(fā)展成肝硬化，少數(shù)可發(fā)展為肝癌，對(duì)人體生命健康造成嚴(yán)重?fù)p害，因此乙型肝炎病毒通用型的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的乙型肝炎病毒通用型染料法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據(jù)乙型肝炎病毒通用型保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

【試劑組成】

成分	十孔盒包裝
2×qPCR MagicMix	500μL（棕色管）
熒光PCR專用模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
乙型肝炎病毒通用型PCR引物混合物	100μL（白蓋）
乙型肝炎病毒通用型PCR陽(yáng)性對(duì)照 (1×10E8 拷貝/μL)	50μL（紅蓋）
DNA病毒裂解液（試用裝）	15次（9 mL）
使用手冊(cè)	1份

【儲(chǔ)存條件及有效期】

低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

【自備試劑】DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見(jiàn)使用方法）。

【使用方法】

一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA

1. 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?span>10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA/提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：

成分	樣品管 N+2個(gè)	PCR陰性對(duì)照管	PCR陽(yáng)性對(duì)照管（2-7管）
2×qPCR MagicMix （棕色管）	10 μL	10 μL	各10 μL
乙型肝炎病毒通用型PCR 引物混合液（白蓋）	2 μL	2 μL	各2 μL
自備10×ROX (見(jiàn)注)	2 μL	2 μL	各2 μL
N+2待測(cè)樣品DNA模板	6 μL	不加	不加
第7步所得PCR陽(yáng)性對(duì)照稀釋液（2-7號(hào)）	不加	不加	各6μL（2號(hào)樣到2號(hào)管，3號(hào)樣到3號(hào)管…）

注:僅ABI7500、7700和7900儀器需要使用ROX作為對(duì)照，其他熒光PCR儀器（如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000和LightCycler480）不需要使用ROX，則用水替代。

12. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR（具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	92℃	5分鐘
PCR反應(yīng) （30個(gè)循環(huán)）	92℃	60 秒
	54℃	60 秒
	72℃	60 秒

13.數(shù)據(jù)采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA時(shí)，最大吸收光譜在471 nm，結(jié)合DNA時(shí)的最大吸收光譜在500 nm，最大發(fā)射光譜在530 nm。信號(hào)采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。

四、數(shù)據(jù)處理

14. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

15. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽(yáng)性。