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更新時(shí)間:2024-07-17 21:42:58瀏覽次數(shù):310評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
---|---|---|---|
貨號(hào) | YLK10365P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱(chēng) | Brucella Bovis PCR Kit |
保存條件 | 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 | 有效期 | 12個(gè)月 |
試劑盒說(shuō)明 | 不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用 |
牛布魯氏桿菌PCR試劑盒
商品名稱(chēng):牛布魯氏桿菌PCR試劑盒
Name :Brucella Bovis PCR Kit
牛布魯氏桿菌(Brucella bovis,又叫Brucella abortus)又叫流產(chǎn)布氏桿菌,是一種革蘭氏陰性的不運(yùn)動(dòng)細(xì)菌,無(wú)莢膜(光滑型有微莢膜),觸酶、氧化酶陽(yáng)性絕對(duì)嗜氧菌,可還原硝酸鹽,細(xì)胞內(nèi)寄生,可以在牛體內(nèi)存活,也能引起人類(lèi)疾病。一頭奶牛如果感染布魯氏桿菌,沒(méi)有得到及時(shí)的清潔和防疫,布病很快會(huì)在牲畜群體里暴發(fā),進(jìn)而增加人被感染的幾率。其特點(diǎn)是生殖器官、胎膜及多種器官組織發(fā)炎、壞死和肉芽腫的形成,引起流產(chǎn)、不孕、睪丸及關(guān)節(jié)炎等癥狀。感染人后可能導(dǎo)致多個(gè)器官或臟器系統(tǒng),骨骼或關(guān)節(jié)的病變,感染組織中可觀察到具有組織學(xué)特征的肉芽腫。晚期可能失去勞動(dòng)能力、臥床不起、出現(xiàn)神經(jīng)或精神病方面的癥狀。因此牛布魯氏菌的檢測(cè)具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)PCR原理開(kāi)發(fā),它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供細(xì)菌DNA模板。
2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專(zhuān)一性強(qiáng),只擴(kuò)增牛布魯氏桿菌。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(亮黃蓋) |
超純水 | 1 mL(藍(lán)色) |
牛布魯氏桿菌PCR引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
牛布魯氏桿菌PCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8拷貝/ul) | 50 μL(黃蓋) |
核酸釋放劑 | 20次(1ml,綠蓋) |
使用手冊(cè) | 1份 |
說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
【自備試劑】
樣品DNA。
【使用方法】
一、樣品DNA的制備
1. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用10μL陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
1. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取/試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免DNA提取的核酸釋放劑,本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為PCR模板,省略了DNA提取步驟。其使用手冊(cè)可咨詢本公司客服索取。
二、設(shè)置PCR反應(yīng)(40 μL體系)
2. 對(duì)N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:
成分 | N+2個(gè) 樣品管 | PCR陰性對(duì)照 | PCR陽(yáng)性對(duì)照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各20 μL | 20 μL | 20 μL |
牛布魯氏桿菌 PCR引物混合液 | 各2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2個(gè)樣品DNA模板 | 各18 μL | - | - |
PCR陰性對(duì)照 | - | 18 μL | - |
PCR陽(yáng)性對(duì)照(用牛布魯氏菌PCR陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液) | - | - | 18 μL |
3. 按下表設(shè)置PCR反應(yīng):
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min |
PCR反應(yīng) (35個(gè)循環(huán)) | 94℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 60 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測(cè)
取10-20 μL PCR產(chǎn)物。電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加loading buffer。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為450bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn),陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋10倍后重復(fù)PCR擴(kuò)增以排除PCR抑制劑的感染。
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