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NCI-H2170 人肺癌細(xì)胞（STR鑒定）

簡(jiǎn)介：

人肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞，從一個(gè)患有鱗狀細(xì)胞癌的男性患者的肺部分離。組織捐贈(zèng)者是一個(gè)不吸煙的人。

細(xì)胞特性：

1） 來(lái)源：男性  肺

2） 形態(tài)：上皮樣   貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存：

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的注意事項(xiàng)：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI 1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

注意事項(xiàng)：
a)該細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，初期為上皮樣細(xì)胞的團(tuán)簇，隨著細(xì)胞的增殖，細(xì)胞團(tuán)簇會(huì)慢慢融合并形成單層細(xì)胞。
b)該細(xì)胞復(fù)蘇后初始活力很低，狀態(tài)恢復(fù)較慢，是正?，F(xiàn)象，請(qǐng)耐心培養(yǎng)，正常換液。
c)復(fù)蘇和傳代初期會(huì)有一些中度到重度的細(xì)胞和碎片懸浮物出現(xiàn)，日常培養(yǎng)中也總會(huì)有一些漂浮的細(xì)胞和一些碎片存在，是正?，F(xiàn)象。建議不要丟棄這些漂浮的細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兛赡苋匀痪哂谢盍?。?qǐng)保留漂浮的細(xì)胞，將它們離心后再加入到原始培養(yǎng)瓶中，以增加細(xì)胞密度，幫助細(xì)胞更好更快的增殖，否則可能會(huì)由于細(xì)胞密度過(guò)低導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢或停止。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

NCI-H2170 人肺癌細(xì)胞（STR鑒定）

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