大鼠精原細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠精原細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1284h
組織來源 ：睪丸組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介：
精原細(xì)胞分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質(zhì)地堅(jiān)韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進(jìn)入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實(shí)質(zhì)，將實(shí)質(zhì)分為睪丸小葉，數(shù)量約為100～200。每個(gè)小葉內(nèi)約有2～4條生精小管具有產(chǎn)生精子的作用；生精小管之間的結(jié)締組織中有睪丸間質(zhì)細(xì)胞，具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱直精小管)，精直小管進(jìn)入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng)，之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12～15條輸出小管通過睪丸后上緣進(jìn)入附睪。生精小管的生精上皮是精子產(chǎn)生的地方，由生精細(xì)胞和支持細(xì)胞構(gòu)成，成人的生精小管有30～70cm 長。
精子的產(chǎn)生過程包括生精細(xì)胞的分化、支持細(xì)胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細(xì)胞并不是一種細(xì)胞，它是多種細(xì)胞的統(tǒng)稱，包括精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，最終形成精子進(jìn)入到管腔之中，并借助生精上皮外側(cè)的肌樣細(xì)胞的收縮作用向下一級管腔移動(dòng)。精原細(xì)胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過多次有絲分裂而形成的細(xì)胞。原始的胚細(xì)胞經(jīng)分化形成精原細(xì)胞，精原細(xì)胞經(jīng)復(fù)制形成初級精母細(xì)胞，初級精母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂后形成次級精母細(xì)胞，再經(jīng)過減數(shù)第二次分裂形成精細(xì)胞。
精細(xì)胞經(jīng)過變形最終形成精子。精原細(xì)胞屬于雄性生殖細(xì)胞的早期發(fā)育階段，能不斷地進(jìn)行有絲分裂，增加細(xì)胞數(shù)量，并分化為精母細(xì)胞。精原細(xì)胞貼近基膜，細(xì)胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細(xì)胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀 不變。在增殖過程中，通過精原細(xì)胞的分裂和分化，由精原細(xì)胞產(chǎn)生精母細(xì)胞，進(jìn)入成熟 分裂，因而通過增殖可大大增加精母細(xì)胞的數(shù)量。按理論推算，一個(gè)精原細(xì)胞通過數(shù)次細(xì) 胞分裂，可形成上百個(gè)初級精母細(xì)胞。但在生精過程早期，生精細(xì)胞很易發(fā)生變性，故實(shí) 際上少于這個(gè)數(shù)字。在精原細(xì)胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細(xì)胞不再繼續(xù)分裂， 而是保留下來，成為新的精原干細(xì)胞，因此通過增殖不僅能使精原干細(xì)胞不斷得到更新， 且能使精原干細(xì)胞保持一定數(shù)量，從而使精子的產(chǎn)生持續(xù)地進(jìn)行下去，不會(huì)枯竭。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、G D N F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 圓形、橢圓形
傳代特性 ： 可傳2-3代
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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