大鼠精原干細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠精原干細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1194h
組織來源 ：睪丸組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介：
精原干細(xì)胞分離自睪丸組織；精原干細(xì)胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的一群生精干細(xì)胞，是成體內(nèi)的定向干細(xì)胞。精原干細(xì)胞的一些du特優(yōu)勢使其成為動物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細(xì)胞。精原干細(xì)胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項(xiàng)生命活動的調(diào)節(jié)機(jī)制的深入研究，精子發(fā)生機(jī)理的進(jìn)一步闡明以及精原干細(xì)胞轉(zhuǎn)染，異體、異種移植技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細(xì)胞用于體外培養(yǎng)。
在哺乳動睪丸內(nèi)，精子發(fā)生時一個受高度調(diào)控和持續(xù)的過程，精原干細(xì)胞(SSC s)一方面進(jìn)行自我更新維持干細(xì)胞數(shù)量，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細(xì)胞直至最后生成精子。精原干細(xì)胞定居在曲精細(xì)管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發(fā)生的最原始細(xì)胞，也是動物體內(nèi)一起能將遺傳信息傳遞的干細(xì)胞。精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動物等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。精原干細(xì)胞(SSC s)是生精上皮近基底膜的一群細(xì)胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內(nèi)唯yi能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細(xì)胞。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 梭形、圓形
傳代特性 ： 可傳1-2代
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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