大鼠肌源性干細(xì)胞
產(chǎn)品名稱(chēng) :大鼠肌源性干細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB1190h
組織來(lái)源 :肌肉組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
肌源性干細(xì)胞分離自肌肉組織。肌源性干細(xì)胞(M D SC s) 屬于成體多能干細(xì)胞, 具有多細(xì)胞系分化和自我更新能力。通過(guò)誘導(dǎo)刺激,M D SC s可以分化為脂肪、骨骼、軟骨、平滑肌和神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞和組織類(lèi)型。作為基因治療和組織工程的供體細(xì)胞,已成為治療心肌梗死、D uchenne氏肌營(yíng)養(yǎng)不良等疾病的研究熱點(diǎn)。近年來(lái),肌源性干細(xì)胞在治療尿失禁等方面的應(yīng)用逐步得到重視。
需注意的是,肌源性干細(xì)胞主要存在于骨骼肌組織中,只是成熟組織的很少部分細(xì)胞。平時(shí)處于靜止?fàn)顟B(tài),在細(xì)胞應(yīng)激和組織缺失時(shí)才會(huì)激活。并且隨著年齡的增加,所含細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,而目前臨床疾病的治療主要是針對(duì)成體進(jìn)行。肌源性干細(xì)胞的體外擴(kuò)增對(duì)細(xì)胞移植和干細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療至關(guān)重要。對(duì)肌源性干細(xì)胞的擴(kuò)增研究發(fā)現(xiàn),EG F、FG F-2和SC F可以通過(guò)減數(shù)分裂或促使不分裂細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂周期,從而刺激細(xì)胞增生。更重要的是,細(xì)胞因子誘導(dǎo)的體外擴(kuò)增可以通過(guò)自我更新不刺激細(xì)胞分化,從而保持干細(xì)胞表型。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :梭形、多角形
傳代特性 :可傳5代左右。3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶(hù)收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴(lài)氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。