小鼠小梁網(wǎng)細胞
產(chǎn)品名稱 ：小鼠小梁網(wǎng)細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB0821h
組織來源 ：眼球
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
小梁網(wǎng)細胞分離自眼球組織。小梁網(wǎng)由角膜基質(zhì)纖維、后界膜和角膜內(nèi)皮向后擴展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內(nèi)側(cè)。小梁網(wǎng)細胞在眼內(nèi)壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。小梁網(wǎng)細胞內(nèi)有特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰膽/堿和神經(jīng)肽Y。青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病，小梁網(wǎng)細胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因?qū)W研究的重要手段之一。
在小梁網(wǎng)細胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機制，小梁網(wǎng)細胞可合成不同類型的細胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學(xué)觀察可見，剛從組織塊長出的原代細胞，形態(tài)各異，多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層，細胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮，包膜清晰。
細胞特性
1) 組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2) 細胞鑒定：NSE免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式：梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0.1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：梭形、多角形
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% ；C O2，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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