人呼吸道上皮細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :人呼吸道上皮細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0525h
組織來源 :呼吸道
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
人呼吸道上皮細(xì)胞分離自呼吸道。呼吸道是肺呼吸時氣流所經(jīng)過的通道,有肺脊椎動物的呼吸道分上、下兩部 :鼻、咽和喉合稱上呼吸道。氣管及其以后一分再分的管道,合稱為下呼吸道,或稱為氣管樹。氣管樹是隨著動物的進(jìn)化逐漸復(fù)雜化的。整個呼吸道內(nèi)表面都分布有分泌液和纖毛(鼻孔、咽后壁和聲帶黏膜除外) ,它能溫暖(或冷卻) 、濕潤和凈化吸入的空氣,對于呼吸器官和機(jī)體有著保護(hù)作用。
呼吸道以骨或軟骨做支架,其內(nèi)表面覆蓋著黏膜,黏膜內(nèi)分布著豐富的毛細(xì)血管。呼吸道上皮細(xì)胞屬于假復(fù)層纖毛柱狀上皮,分布于呼吸道的內(nèi)表面,主要由柱狀,杯形,梭形和錐形等不同形狀細(xì)胞組成??瓷先ハ駨?fù)層上皮,但實(shí)際上所有細(xì)胞底部均附于基膜上,屬單層上皮,故稱假復(fù)層柱狀上皮,上皮表面有纖毛,杯狀細(xì)胞可分泌粘液,包裹著大量細(xì)菌,借助纖毛不斷擺動將其慢慢移動至出消化道。
細(xì)胞特性
1) 組織來源于人的正常呼吸道組織。
2) 細(xì)胞鑒定:角蛋白(CK-19)免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長方式:鋪路石狀細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 :鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :上皮細(xì)胞樣
傳代特性 :可傳2-3代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。