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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | YLK10011P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研實驗 | 英文名稱 | Fowl Adenovirus Detection Kit |
| 保存條件 | -20℃±5℃，避光保存 | 有效期 | 12個月 |
| FADV 反應(yīng)液 | 500μL×2 管 | FADV陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
禽腺病毒(FADV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
通用名稱：禽腺病毒(FADV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
Name ：Fowl Adenovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒
【預(yù)期用途】
禽腺病毒(Fowl Adenovirus, FADV)是無囊膜、線性雙股 DNA 病毒,屬于腺病毒科、禽腺病毒屬成員。該病毒可感染雞、火雞及其他禽類。FADV 可致雞發(fā)生包涵體肝炎、心包積水綜合征和肌胃糜爛等疾病。該病常與禽類其他病原混合感染,感染雞只可繼發(fā)再生障礙性貧血、肝炎及產(chǎn)蛋量下降等。FADV 呈世界性分布,病毒可經(jīng)糞-口途徑水平傳播,也可垂直傳播,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。
本試劑盒適用于檢測呼吸道分泌物棉拭子（感染 I 群禽腺病毒的雞、火雞、鵝、鵪鶉）、卵巢、輸卵管、卵泡、子宮和輸卵管粘膜組織、泄殖腔拭子（感染 II、III 群禽腺病毒的雞、鴨）等樣本中的禽腺病毒，用于禽腺病毒感染的輔助診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計一對禽腺病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針[1]， 用熒光 PCR 技術(shù)對禽腺病毒的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
FADV 反應(yīng)液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
FADV 陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
病死禽取卵巢、輸卵管、卵泡、子宮和輸卵管粘膜組織；活雞取呼吸道拭子或泄殖腔拭子，放于 1mL 50%
甘油生理鹽水中
【保存和運輸】
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織樣品：稱取樣品約 1g，手術(shù)/剪剪碎混勻后，于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；泄殖腔拭子直接取 100μL 提取
1.2 核酸提取
推薦采用公司生產(chǎn)的核酸提取/或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請 按照試劑說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 | FADV 反應(yīng)液 | 酶液 |
用量（樣本數(shù)為 N） | 20μL | 1μL |
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
5. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
6. 質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。
7. 檢測方法的局限性
1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
3. 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
4. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
6. 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；
7. 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1. 所有操作嚴格按照說明書進行；
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，wan全混勻并短暫離心；
3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7. 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。
【參考文獻】
[1]文艷玲, 禽腺病毒 hexon 基因克隆表達及間接 ELISA 和熒光 PCR 檢測方法的建立[J]. 廣西大學(xué), 2008.
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