SRM3655溶液中的聚糖標(biāo)準(zhǔn)品 (美國NIST)主要用作測(cè)量酶促釋放的 N-連接聚糖的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。 SRM 3655 的潛在應(yīng)用包括分析技術(shù)的基準(zhǔn)測(cè)試和可比性，作為確保系統(tǒng)適用性和分析方法驗(yàn)證的材料。該材料還可用于對(duì)內(nèi)部校準(zhǔn)器或控制材料進(jìn)行賦值。SRM 3655 由十三 (13) 種通常與單克隆抗體治療相關(guān)的聚糖水溶液組成。每種溶液都含有已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的純化的游離還原聚糖。

規(guī)格：

一個(gè) SRM 3655 單元由 13 個(gè) 0.5 mL 小瓶組成，每個(gè)小瓶含有大約 0.2 mL 冷凍溶液。

聚糖的認(rèn)證值：

表 1 中提供的 13 種聚糖的認(rèn)證質(zhì)量分?jǐn)?shù)和估計(jì)不確定度基于溶液的重量法制備以及綜合純度分析獲得的結(jié)果，以及使用液相色譜法確定的分析結(jié)果-串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS/MS) 分析。 NIST 認(rèn)證值是 NIST 最有信心的值，其準(zhǔn)確性在于所有已知或可疑的偏差來源都已被調(diào)查或考慮在內(nèi) [1]。數(shù)值以質(zhì)量分?jǐn)?shù)單位（微克/克）提供，為方便用戶，提供物質(zhì)濃度（微摩爾/升）。使用 22 °C 時(shí)的水密度 (0.9977 g/mL ± 0.00083 g/mL) [2] 和平均值，相對(duì)每個(gè)聚糖的分子量和不確定性 [3]。

來源、準(zhǔn)備和分析

來源和制備：用于制備 SRM3655溶液中的聚糖標(biāo)準(zhǔn)品 (美國NIST)的純化聚糖粉末是在 G.J. 實(shí)驗(yàn)室通過化學(xué)酶合成方法 [9-13] 生產(chǎn)的。烏得勒支大學(xué)（荷蘭烏得勒支）和喬治亞大學(xué)復(fù)雜碳水化合物研究中心（喬治亞州雅典）的恩賜。

聚糖粉末在 NIST 的純水中通過重量分析法重構(gòu)，混合均勻，然后分裝。 SRM 3655 的單位在 -70 ℃ 以下冷凍保存直至使用。

分析：SRM 3655 價(jià)值分配中的所有分析均在 NIST 進(jìn)行。

通過 LC-MS/MS 分析測(cè)量聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)：使用 LC-MS/MS 分析實(shí)現(xiàn)了 SRM 3655 中聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的定量測(cè)量。在三重四極桿質(zhì)譜儀上使用正極性的多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 分析單獨(dú)檢測(cè)聚糖。使用多孔石墨化碳分析色譜柱實(shí)現(xiàn) LC 分離。使用 50 mmol/L NH4HCO2（流動(dòng)相 A）和 0.1% (v/v) 甲酸的乙腈 (ACN) 溶液（流動(dòng)相 B）從固定相中洗脫聚糖。測(cè)量值校準(zhǔn)到聚糖標(biāo)準(zhǔn)品，其純度和質(zhì)量分?jǐn)?shù)在 NIST 進(jìn)行了評(píng)估。將市售的棉子糖材料按重量計(jì)加標(biāo)到樣品和校準(zhǔn)溶液中，并用作 LC-MS/MS 漂移的內(nèi)部對(duì)照。 LC-MS/MS 分析在三到五個(gè)獨(dú)立組中進(jìn)行，在不同的日子里重復(fù)六到七次。每個(gè)聚糖的兩個(gè)片段化轉(zhuǎn)變被歸一化為內(nèi)標(biāo)信號(hào)。對(duì)兩種色譜分離的異頭異構(gòu)體（α 和 β）進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化。