Cy3熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標(biāo)記量)

一. 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Cy3熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒可以通過(guò)抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴(lài)氨酸），簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)抗體/蛋白與Cy3熒光染料的共價(jià)偶聯(lián)。此為通用型試劑盒，適合Cy3熒光標(biāo)記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy3熒光染料，且不會(huì)損失抗體/蛋白。

二. 試劑盒組成與存儲(chǔ)

收到后將Cy3-mix(含10 % Cy3染料)儲(chǔ)存在-20?C。Coupling Reagent、Cy3-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長(zhǎng)期保存。

三. 實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10 mg)，溶解于1 mL純水中，加入100 μL Coupling Reagent，混合均勻待用。

注：抗體/蛋白在1~10 mg內(nèi)均用1mL純水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent。超出此范圍，請(qǐng)按比例增減，如0.5 mg抗體/蛋白，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。

(以下步驟按標(biāo)記1 mg抗體/蛋白為例)

2. 根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度，稱(chēng)取0.1 ~1 mg Cy3-mix固體加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a) 若Cy3-mix用量超出1 mg，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過(guò)量，引起熒光部分淬滅;

(b) 若低于1 mg的Cy3-mix難以稱(chēng)取，可先取1 mg Cy3-mix固體溶解于100 μL Cy3-mix溶解液，再按需取Cy3-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy3-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存。

3. 室溫避光反應(yīng)30 min，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間不影響偶聯(lián)效率。

4. 將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管，10000 rpm超濾5 min，即可除去未反應(yīng)的Cy3-mix，為提高純度，可加入純水重懸抗體/蛋白，重復(fù)超濾1~2次。

5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy3熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液。

四. 注意事項(xiàng)

1. 熒光標(biāo)記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分，建議低于以下比例:

注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過(guò)超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記。

2. 偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存。通常在4 ℃下可保存6~12個(gè)月。如需保存更長(zhǎng)時(shí)間，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油，在-20℃保存。